[发明专利]一种高效提取深层液态发酵生产灰树花菌丝体多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体是一种高效提取深层液态发酵生产灰树花菌丝体多糖的方法。

背景技术

灰树花[Grifola frondosa(Dicks.Fr.)S.F.Gray]隶属担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、多孔菌科、树花菌属，又名贝叶多孔菌、千佛菌、栗子菌、云蕈、莲花菌等，日本称之为舞茸，美国称之为林鸡。其肉质脆嫩，味如鸡丝，能烹调成多种美味佳肴，且含有多种生理活性物质，是一种极具开发和研究价值的食、药兼用蕈菌。

灰树花多糖是灰树花众多生物活性物质中最主要的一类活性成分，它系从灰树花的子实体或菌丝体与发酵液中分离得到的一类富含β－1，6－及β－1，3－糖苷键的真菌多糖。研究表明，灰树花多糖具有非常广泛的生物学活性，在抗肿瘤、降血糖、抗肝炎、抗HIV(艾滋病病毒)以及改善免疫系统功能等方面均有很好的作用；并且在某些方面(如抗肿瘤作用)，灰树花多糖具有明显高于其它食药用真菌多糖的医疗效果，同时还具有用药方便(如口服有效)的优越性，为此，人们对灰树花多糖的研究兴趣愈来愈浓，不断有关于其生物活性及药理功能的动物实验和临床研究报道产生，众多科研工作者也都积极投入到其制备、结构分析、构效关系及生物活性等相关性质的研究中去，使灰树花多糖的相关性质研究已成为当前该领域的研究热点之一。

我国从80年代初开始对其进行人工栽培驯化，90年代开始商品化生产，发展势头强劲。但是，灰树花子实体的人工栽培周期长、占地面积大、受自然气候条件的影响大、且暴露在环境中易被杂菌污染，大规模的人工栽培难以推广。而天然灰树花子实体产量有限，难以满足灰树花及其系列产品的市场需求，故目前已倾向于利用不受自然条件限制的、可大规模工业化生产的液态深层发酵技术来培养灰树花菌丝体。

目前国内已有院校展开深层液态发酵生产灰树花的研究，都是以获得灰树花的菌丝体为主要目标展开研究的，而目前国内关于液态发酵生产灰树花的功效成分多糖的相关报道较少。目前关于真菌类原料多糖的提取工艺多为传统的水提醇沉法，即向干燥后的菌丝体加入8‐20倍重量的水，控制温度80‐100℃浸泡2‐4h，静止1‐2h，然后反复浸提2‐3次，然后合并上清液进行浓缩，再用50‐85％的酒精进行醇沉，最终烘干即可得到粗多糖。此工艺的缺点是需加入大量水长时间进行浸提，并且为提高收率需反复浸提2‐3次，操作周期较长、劳动强度偏大，并且多糖的提取收率多在2‐3％，产品成本比较昂贵。并且分离的上清液作为废液直接弃液排掉，增加了治污成本。

发明内容

本发明的目的是为了解决传统多糖的水提醇沉的技术瓶颈，采用此发明能够快速、高效生产出灰树花多糖。

为了实现上述目的，本发明主要按照下述步骤进行：

本发明的高效提取深层液态发酵生产灰树花菌丝体多糖的方法包括下述步骤：

1)分离：将灰树花发酵液经分离，得到灰树花上清液和湿菌丝体；

2)超声处理：向步骤1)所得的湿菌丝体中加入步骤1)所得2‐5倍质量的灰树花上清液进行稀释，搅拌均匀后进行超声处理10‐40min，得到超声处理液；上清液的添加主要是作为水溶性溶液来进行提取菌丝体中的多糖，添加量偏少，提取不完全，收率偏低，并且在超声过程中容易温度偏高，影响设备使用；若添加过多，后期处理需消耗大量的能源，成本偏高；

3)复合酶解：将步骤2)所得超声处理液调节pH值为4‐7，控制温度30‐70℃，然后向其加入相当于干菌丝体重量0.2‐3％的纤维素酶、和0.2‐3％的蛋白酶，进行酶解1‐4h，得到酶解液；

4)分离、浓缩：将步骤3)所得的酶解液进行分离，将分离所得到的上清液经低温浓缩，得到浓缩比重为1.25～1.40(50℃热测)的浓缩浆；

5)醇沉、烘干：加入浓缩浆重量3-5倍量的95％酒精，用酒精计检测混合液酒精度为65-80％(v/v)，静置2-6h，将沉淀物进行真空烘干；烘干至干燥物水分含量为3～8％，即得菌丝体多糖提取物。

其中，步骤1)、4)所述的分离为离心分离，采用三足离心机或高速离心机等离心设备进行，转速为1500‐5000rpm。

步骤2)超声所用的设备为超声波细胞粉碎机，其他同等超声设备均可；超声的功率为0.5‐2.5kw。

步骤3)所述的纤维素酶的单位酶活为15000μ/g～25000μ/g，所述的蛋白酶的单位酶活为47000μ/g～53000μ/g。

所述的低温浓缩过程均要求控制温度不高于75℃，真空度不低于0.085Mpa。