[发明专利]布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属临床医学检测技术领域，具体涉及胶体金免疫层析检测技术。

背景技术

布鲁氏菌（Brucella）属于兼性胞内寄生的革兰氏阴性球杆菌，无孢子和荚膜，不运动，已经确认布鲁氏菌有9个种，其中具有致病性的有7个种，包括B.abortus、B.melitensis等。布鲁氏菌能引起人和多种动物的急、慢性感染，其引发的疾病简称布病，被感染的人和动物表现流产及不孕不育等症状。所有数据显示全世界由于布病引起的损失是严重的，既包括对动物产品所带来的直接经济损失，如奶产量下降、流产、延迟受孕等，也包括对公共卫生等所造成的间接经济损失，如治疗的费用及生育能力下降等。由于布鲁氏菌具有高致病性和快速雾化的特性，美国疾病预防控制中心（CDC）已经将布鲁氏菌的3个种列为潜在的生物武器。因为其初始症状很容易和流行性感冒相混淆，布病感染后较难做出诊断。

目前，布鲁氏菌的检测方法主要分为病原分离培养、血清学试验和核酸检测等。病原分离培养主要通过其培养特性及生化试验指标进行鉴别，该方法耗时长，不利于临床快速诊断；核酸检测主要利用各式PCR进行检测，包括多重PCR、巢式PCR、实时荧光定量PCR等，此类方法敏感度好且准确性相对较高，但需要专业的仪器设备进行检验操作；常用的血清学检测方法包括试管凝集试验（SAT）、补体结合试验（CF）、乳汁环状试验（MKT）、虎红平板凝集试验（RBT）及酶联免疫吸附试验（ELISA）等，这些方法大多需要专业的设备或操作人员进行试验，对试验条件要求较高，而胶体金免疫层析（GICA）技术可以克服其它检测方法耗时长、需要专业仪器设备等缺点。

根据徐卫民等2006年的一项研究，滴金免疫测定法的敏感性为95．35%，特异性为98．99%，其与SAT的符合率为97．89%；2008年朱明东等将GICA应用于牛布鲁氏菌病检测，表明GICA方法具有试剂敏感、特异，而且血清用量少，操作简便的特点；2009年邵丰尧等将GICA在布鲁氏菌病监测地区进行了现场应用，同时采用RBT进行检测，验证其检测效果，再次证明了GICA与RBT同样具有较好的敏感性，但是GICA还具有操作简便、快速、微量等优点。从以上的研究来看，GICA具有迅速、准确、方便的特点，在布病诊断中显示了广阔的应用前景。

BP26、OMP31和OMP25是三种布鲁氏菌的结构抗原。OMP是外膜蛋白的简称(outer membrane proteins，OMPs)，其中OMP25据PCR-RFLP分析表明，在布鲁氏菌种及生物型变种中是一个高度保守的基因片段，而OMP31存在于除B.abortus之外其它所有的布鲁氏菌中，免疫原性良好；BP26（periplasmic protein 26）是一种具有强免疫原性、可以由细胞内向外释放的可溶性外周浆蛋白，相对于固定的外膜蛋白来说，具有易于检测的优点。本发明以GICA技术为基础，以工程表达的BP26、OMP31和OMP25抗原为检测抗体制作检测试剂盒。

发明内容

本发明旨在提供一种布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒，用于人体血清、血浆或全血中布鲁氏菌抗体的检测，对布鲁氏菌感染进行辅助诊断。本发明可解决人体布病感染检测需专业仪器及耗时长等问题，提供一种检测特异性强、操作简单快速的试剂盒，可广泛用于各级医疗机构及体检普查的检测。

本发明包括卡盒和试纸条两部分。

所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，材质为ABS树脂（丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物）；盒盖与盒底由柱和柱槽以插接方式连接，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见加样孔和检视窗，加样孔为长圆形，检视窗为长方形；在检视窗位置可见反应膜、检测线T和质控线C，在加样孔位置可见试纸条样品垫；盒盖正面印有加样孔标注、结果判别说明及信息记录栏。

所述试纸条置于卡盒内部，安放在盒底上的试纸条槽中；试纸条由基板、双面胶、胶体金垫、样品垫、胶带、反应膜、吸样垫组成。基板材质为PVC塑料（聚氯乙烯），样品垫及胶体金垫材质为无纺布，反应膜为硝酸纤维素膜，吸样垫材质为吸油纸。所述试纸条以高效鼠源抗人IgG单克隆抗体作为捕获抗体，用胶体金标记形成抗人IgG-胶体金复合物并固化于胶体金垫上；以工程表达的布鲁氏菌BP26、OMP25或OMP31抗原包被于反应膜检测线T位置；质控线C位置包被有羊或兔抗鼠IgG抗体。