[发明专利]一种深层液态发酵生产樟芝胞外多糖的方法

权利要求书

1.一种制备樟芝发酵液的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：

将樟芝种子培养液接入灭菌后的液体发酵培养基进行深层液态发酵得到樟芝发酵培养液；所述的深层液态发酵接种量为10~20 g/100g，通风比为1：0.3-1.0vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22~30℃下培养4~7天；所述的液体发酵培养基为：葡萄糖1-3%、淀粉1-3%、蛋白胨0.1-0.5%、麸皮0.1-0.5%、磷酸二氢钾0.1-0.5%、七水硫酸镁0.1-0.5%、消泡剂0.01-0.05%、20000u/ml的耐高温α-淀粉酶0.001-0.007% v/v，调节pH值4.8。

2.根据权利要求1所述的制备樟芝发酵液的方法，其特征在于所述的樟芝种子培养液通过二级培养获得，具体方法如下：

1）一级种子培养：将经活化摇瓶菌种接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为0.1~2%，通风比为1：0.3-1.0vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22~30℃下培养6~8天，得到樟芝一级种子培养液，备用；

2）二级种子培养：将步骤1）所得的一级种子培养液接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为10~20%，通风比为1：0.3-1.0vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22~30℃下培养4~7天，得到所述的樟芝种子培养液。

3.根据权利要求2所述的制备樟芝发酵液的方法，其特征是所述的液体种子培养基为：葡萄糖2-4%、蛋白胨0.1-0.5%、酵母粉1-3%、磷酸二氢钾0.1-0.5%、七水硫酸镁0.1-0.5%、消泡剂0.01-0.05%，调节pH值4.8。

4.根据权利要求1所述的制备樟芝发酵液的方法，其特征是深层液态发酵的培养终点：发酵液香气浓郁、菌球变碎、滤液浑浊；pH值、还原糖降至最低并略有波动，pH值3.0-4.0,还原糖1.0 g/100g以下；镜检菌丝细碎，大量孢子，无杂菌污染。

5.一种樟芝胞外多糖提取的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：

1）分离：将权利要求1所得的樟芝发酵液进行分离，得到樟芝上清液；

2）浓缩：将步骤1）所得的上清液采用二级低温浓缩，得到浓缩比重为1.25～1.40的浓缩浆；

3）醇沉、烘干：加入浓缩浆重量3-5倍量的95%酒精，用酒精计检测混合液酒精度为65-80%，静置8-16h，将沉淀物进行真空烘干，温度50-75℃，真空度不低于0.085MPa；烘干至干燥物水分含量为3～8 g/100g，即得胞外糖。

6.根据权利要求5所述的樟芝胞外多糖提取的方法，其特征在于所述步骤1）中所述的分离采用卧螺离心机进行，转速控制在2500-3500r/min。

7.根据权利要求5所述的樟芝胞外多糖提取的方法，其特征在于所述步骤2）中所采用的二级浓缩为：一级采用双效蒸发器浓缩，将发酵液浓缩到比重为1.15-1.20，二级采用单效浓缩器浓缩，即将比重为1.1-1.20的浓缩液继续浓缩到比重为1.25～1.40的浓缩浆；浓缩过程均要求控制温度不高于75℃，真空度不低于0.085MPa。