[发明专利]家畜精液冷冻保存用抗冻剂、稀释液及其应用

说明书

技术领域

本发明属于哺乳动物精液的超低温冷冻保存技术领域，具体涉及一种家畜精液冷冻保存用抗冻剂，同时还涉及一种家畜精液冷冻保存稀释液，进一步还涉及家畜精液冷冻保存稀释液的应用。

背景技术

哺乳动物精液冷冻保存技术为高度集约化的现代畜牧业发展提供了重要的技术支持。当甘油作为一种冷冻保护剂被用于精液冷冻保存以来，世界各国就开始了大规模的研究与应用。精液冷冻保存时间可以长达数十年之久，解决了哺乳动物雄性种质资源保护问题，使雄性优良种质资源的使用不受时间、地域的限制，便于开展省际、国际之间的协作，提高优良种畜的利用率；在建立全球优良物种基因库，延长优良种畜的使用寿命；在及早进行后裔测定，缩短世代间隔和加快动物育种进程方面以及在保留和恢复精液供应、血统更新、引种、降低生产成本等方面均有重要意义。

精液冷冻是保存遗传资源，建立精子基因库的重要措施。而冷冻精子质量好坏与家畜的妊娠率、分娩率等密切相关。从目前的情况来看，尽管冷冻精液已经应用于养牛生产，但需要进一步提高精子活率和受精能力；而猪精子在冷冻解冻以后的精子活率、顶体完整率、质膜完整率等要远低于新鲜精液，精子DNA、线粒体等的损伤要高于新鲜精液，导致在商品化养猪生产中，利用冷冻精液进行人工授精时母猪的受胎率和产仔率都较低而不能广泛应用。为了解决这一问题，科研工作者进行了大量的研究，但是冷冻-解冻后精子活率仍不十分理想。

尽管甘油可以作为一种较好的冷冻保护剂已经可以用于养牛生产，但是以此为基础的冷冻稀释液对精子的保护性能较差，冷冻解冻后精子活率较低，与生产需求还存在较大差距，需要寻找新的冷冻保护剂；而以甘油为基础的冷冻保护剂还不能用于养猪生产。随着全国性、区域性种牛、猪联合育种工作的深入开展，对精液冷冻保护剂研究越来越显得迫切。

有关甜菜碱作为冷冻保护剂用于牛、猪等家畜精液冷冻保存的研究国内外尚未见相关报道。

发明内容

针对目前家畜精液冷冻的不足之处，本发明目的之一在于提供一种用于家畜精液冷冻保存的抗冻剂。实现该目的的技术方案是：

一种家畜精液冷冻保存用抗冻剂，所述抗冻剂为甜菜碱。

所述甜菜碱为从海带中提取的甜菜碱。

针对现有技术的缺陷或不足，本发明的另一目的在于提供一种抗冻稀释液及其制备方法，能有效提高牛、猪精液冷冻-解冻后的精子活率、顶体完整率、质膜完整率和DNA完整性。实现该目的的技术方案是：

一种家畜精液冷冻保存稀释液，所述家畜精液冷冻保存稀释液包括常规稀释液和抗冻剂，所述抗冻剂为甜菜碱。

所述常规稀释液的配方为：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48g、Tris2.42g、新鲜鸡蛋黄10％、青霉素钠0.06g、硫酸链霉素0.1g、蒸馏水100ml。

所述抗冻剂在每100ml常规稀释液中的添加量为50～250mg。

所述家畜精液冷冻保存稀释液中添加有体积比为2％-4％的甘油。

所述家畜精液冷冻保存稀释液的pH值为6.5～7.5。

上述的家畜精液冷冻保存稀释液用于保存猪精液时，所述抗冻剂在每100ml常规稀释液中的添加量为100～200mg。

上述的家畜精液冷冻保存稀释液用于保存牛精液时，所述抗冻剂在每100ml常规稀释液中的添加量为150～250mg。

上述的家畜精液冷冻保存稀释液用于保存羊精液时，所述抗冻剂在每100ml常规稀释液中的添加量为50～100mg。

本发明首次将从海带中提取的甜菜碱作为冷冻抗冻剂用于牛、猪、羊精液冷冻保存，制备方法简单，取材容易，效果可靠，易于推广，适用于牛、猪、羊细管冷冻精液人工授精及精液超低温冷冻后的长期保存和长途运输后输精，可显著提高冷冻-解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率，保持精子的受精活力。

具体实施方式

本发明的家畜精液冷冻保存常规稀释液的方法，包括下列步骤：

(1)在常规稀释液中加入抗冻剂混匀，所述抗冻剂为甜菜碱；

(2)调节溶液pH值为6.5～7.5，过滤灭菌得家畜精液冷冻保存稀释液。

如添加有甘油时，在步骤1所配制的稀释液中添加合适量的甘油。优选的，步骤(1)中在常规稀释液中加入100～200mg抗冻剂时，添加3％的甘油，适合用于猪精液的冷冻保存；在常规稀释液中加入150～250mg抗冻剂时，添加4％的甘油，适合用于牛精液的冷冻保存；常规稀释液中加入50～100mg抗冻剂时，添加2％的甘油，适合用于羊精液的冷冻保存。

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。