[发明专利]HBV长爪沙鼠感染模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及HBV长爪沙鼠感染模型的构建方法。

背景技术

乙型肝炎(HB)是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种以肝脏损伤为主要特征的严重危害人类和动物健康的传染病之一。由于HBV具有严格的宿主特异性，因而缺乏理想的细胞模型或动物模型，从而阻碍了HBV的研究。

目前，用于乙型肝炎研究的实验动物模型主要是灵长类动物或转基因动物，因其价格高、技术难度大，耗时、费力，稳定性较差等不能够得到广泛使用。长期以来，建立生物学背景清晰、简单易得、经济实用的HBV实验动物模型一直是人们所研究的方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种构建HBV动物感染模型的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：用离体大三阳阳性HBV感染血清攻毒动物，得到HBV动物感染模型。

上述方法中，所述离体大三阳阳性HBV感染血清为人源离体大三阳阳性HBV感染血清。

上述方法中，所述动物为鼠，具体为长爪沙鼠；上述动物也可以采用其他啮齿目或其他鼠科动物或其他沙鼠属动物替代。

上述方法中，所述攻毒为连续攻毒3天，每天每只攻毒1次，每次攻毒剂量为0.2ml。上述攻毒的方式采用腿部股静脉注射。

上述的方法在设计、制备或筛选HBV药物或疫苗中的应用也是本发明保护的范围。

离体的HBV感染的大三阳阳性血清在制备构建HBV动物感染模型的试剂盒中的应用也是本发明保护的范围。

本发明的实验证明，由于长爪沙鼠感染模型具有价格低廉、来源丰富、饲养管理方便、操作容易、可重复性强等优势，是HBV感染的首选实验动物，因此，用长爪沙鼠用于HBV感染模型，所取得的研究结果将更加系统、全面、可靠，更具有说服力；发明使用人源HBV血清对长爪沙鼠进行感染试验，可在攻毒后沙鼠肝脏和肾脏中检测到HBVDNA的存在，ELISA方法也可检测到相应的抗原和抗体，应用人源HBV感染沙鼠，建立了可广泛推广使用的价格低廉，饲养简单、操作方便的HBV长爪沙鼠感染模型，避免了目前使用的灵长类动物和转基因动物价格昂贵、来源有限、重复性差、实验要求条件高等不足，构建得到的模型为研究HBV致病机理、种间传播机制、药物筛选以及疫苗研发等提供了理想的感染模型。

附图说明

图1为沙鼠组织中HBV的DNA的检测

图2为HBV感染沙鼠组织病理学观察

图3为HBV感染沙鼠超微病理学观察

图4为HBV感染沙鼠组免疫组织化学观察

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、HBV长爪沙鼠感染模型的构建

一、HBV长爪沙鼠感染模型构建

1、试验长爪沙鼠

选取40只清洁级体重50-80g雄性长爪沙鼠(购自首都医科大学)。HBVELISA试剂盒进行检测，淘汰HBV阳性沙鼠。

分为试验组22只，对照组18只，隔离系统单独饲养。

2、攻毒

试验组沙鼠麻醉后，通过腿部股静脉注射人源离体大三阳阳性HBV感染血清(湖北省宜城中心医院，患者知情)，连续攻毒3d，正常饲养得到HBV长爪沙鼠感染模型。

上述攻毒方式为每天每只注射1次，每只注射剂量为0.2ml/次，

对照组沙鼠麻醉后采用同样的方法注射相同体积的生理盐水，得到对照组处理后沙鼠。

二、HBV长爪沙鼠感染模型的验证

1、样品收集

分别于攻毒后1天(第三次攻毒时间记作第0天)、2天、3天、1周、2周、4周、8周选取上述试验组攻毒后沙鼠和对照组处理后沙鼠麻醉后进行心脏采血并剖杀，取各脏器用2.5％戊二醛-多聚甲醛固定液进行固定。另取肝脏、肾脏、脑和唾液腺等组织样品于—80℃冻存用于后续试验，肝脏冻存组织选取含有胆囊部分。

分别于攻毒后1天、3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周采集未剖杀沙鼠粪便进行检测。同时，攻毒后1天、2天、3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周对未剖杀沙鼠进行断尾采血，收集血清进行ELISA乙肝五项检测。

2、ELISA乙肝五项检测