[发明专利]一种用于高产单抗的细胞培养基添加剂

说明书

技术领域

本发明涉及培养基添加剂，具体地说，涉及一种用于高产单抗的细胞培养基添加剂。

背景技术

生物制药是近年来医药行业中增长最迅速的行业，单克隆抗体作为生物药中最受瞩目的产品类别，约占生物制药的35％。单抗类药物在治疗以肿瘤为主的多种疾病方面起着非常重要的作用，同时因其疗效越来越受患者的青睐，2012年，单抗药物以750亿美元的销售额领跑全球药品市场，年增长率在25％，其中6个单抗药物排名位于全球处方药销售额排行榜的前10位。

与第一代生物技术医药产品相比，新一代产品不是天然物质的仿制，而是对细胞内和细胞表面的各个功能单位包括基因表达的各个环节进行加工。由此可见新一代产品的技术难度更大、研发周期更长、生产成本更高，这也导致了新一代生物医药产品(不管是原研药还是仿制药)的价格居高不下。

但是从疗效方面来看，新一代产品即生物药尤其是单抗针对性强、半衰期长、疗效持续显著、副作用小等特点，所以越来越多的患者渴望接受单抗药物的治疗，但苦于负担不起高昂的医疗费用。同时越来越多的企业投资大量人力物力致力于单抗药物的研发。

目前已经批准上市的大部分单抗药物其推荐成人临床用药剂量均较大，若要满足广大患者的需求，除去价格方面的因素，产能也是最重要的影响患者使用单抗药物的因素之一。同时，产能的提高也能反过来影响价格的走势，因为产能提高在某种意义上来说是节约了成本，利润空间也有所扩增，降价才能最终实现，价格平民化和产能扩大才能使越来越多的患者使用单抗药物治疗疾病。

除了构建单抗高产的细胞株之外，培养单抗高产细胞株的培养基对单抗的最终产量也是至关重要的，国内目前普遍采用通用培养基，一般可从生产培养基的公司购买。

通常，细胞培养基包含多种不同种类的成分，例如氨基酸、维生素、盐、脂肪酸和其它成分：

-氨基酸：例如美国专利US6048728公开了可用于细胞培养基中的以下氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙胺酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

-维生素：例如美国专利US2003/0096414或US5811299描述了可用于细胞培养基的以下维生素：生物素、泛酸盐、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、维生素B6、核黄素、维生素B12、硫胺、腐胺。

-盐：例如美国专利US6399381公开的一种培养基包含：CaCl₂、KCl、MgCl₂、NaCl、NaH₂PO₄、Na₂HPO₄、Na₂SeO₃、CuSO₄、ZnCl₂。另一美国专利文献US2003/0153042例子中公开了可用于培养基的无机盐，该培养基包含：CaCl₂、KCl、MgCl₂、NaCl、NaH₂PO₄、Na₂HPO₄、CuCl₂·2H₂O、ZnCl₂。

-脂肪酸：已知可用于培养基的脂肪酸有：花生四烯酸、亚油酸、油酸、月桂酸、肉豆蔻酸和甲基-β-环糊精，例如美国专利US5045468。环糊精本身不是脂肪，但是它能够与脂质形成复合物，因此在细胞培养基中用它来溶解脂肪。

-其它成分，具体指用于构成无血清细胞培养基的化合物，例如包括葡萄糖、谷氨酰胺、丙酮酸钠、胰岛素或乙醇胺(例如欧洲专利EP274445)，或保护剂如Pluronic F68。Pluronic F68(也称为泊洛沙姆(Poloxamer)188)是一种环氧乙烷(EO)与环氧丙烷(PO)的嵌段共聚物。

标准的“基础培养基”是本领域技术人员熟知的，这些培养基包含上述培养基诸成分。广泛应用的这种培养基的例子有达尔伯克改良伊格尔培养液(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium，DMEM)，DMEMF12(1:1)，Ham’s Nutrientmixture F-10，Roswell Park Memorial Institute Medium(RPMI)，MCDB131，或William’s Medium E。这些商品化培养基可以从例如Gibco、Invitrogen获得。