[发明专利]一种抗Cbk1单克隆抗体的制备与应用

说明书

本发明涉及医学生物工程技术领域，本发明提供一种抗白念珠菌细胞壁蛋白Cbk1单克隆抗体、用于制备该单克隆抗体的多肽、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该单抗、用于制备抗Cbk1单克隆抗体的多肽、杂交瘤细胞株在制备Western Blot或免疫组化检测白念珠菌感染的试剂或试剂盒中的应用以及在制备预防或治疗白念珠菌感染药物中的应用。

技术领域

本发明涉及医学生物工程技术领域，具体涉及一种抗Cbk1单克隆抗体，以及该单克隆抗体在用于抗白念珠菌感染中的应用。

背景技术

细胞壁蛋白Cbk1(Cell wall Biosynthesis Kinase)是白念珠菌酵母态细胞出芽增殖必需基因，是菌株极化生长的必需基因，CBK1基因缺失菌因出芽分裂受限，呈现双核；同时，Cbk1蛋白也是白念珠菌菌丝生长必需基因，提高菌株对细胞膜及细胞壁损伤应激的耐受能力，CBK1基因缺失菌无法形成菌丝，致病力下降，对刚果红、荧光白、潮霉素等细胞膜及细胞壁损伤刺激的敏感性显著升高。Cbk1蛋白定位于白念珠菌酵母态细胞的出芽颈环和菌丝尖端，与Mob2蛋白共同调节酵母态细胞出芽分裂及菌丝生长。由于Cbk1蛋白不仅存在于酵母态细胞表面，而且定位于菌丝表面，还能促进白念珠菌细胞增殖、菌丝形成，以及应对外界各种刺激，因此，Cbk1蛋白是一个很有前景的基于抗体治疗的抗真菌靶标。

目前尚无有关抗Cbk1单克隆抗体的文献报道，也无抗Cbk1单克隆抗体用于抗侵袭性念珠菌的感染的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗白念珠菌细胞壁蛋白Cbk1单克隆抗体、用于制备该单克隆抗体的多肽、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该单克隆抗体的应用。

本发明的第一方面，是提供一种用于制备抗白念珠菌细胞壁蛋白(Cbk1)单克隆抗体的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1或2所示的。

DSYMDEDTSE(SEQ ID NO：1)

PVQQHPQFQP(SEQ ID NO：2)

本发明的第二方面，是提供一种抗Cbk1单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCC No：C201481或CCTCC No：C201482的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明的第三方面，是提供两株杂交瘤细胞株，其保藏编号为CCTCC No：C201481或CCTCC No：C201482。

本发明的第四方面，是提供一种抗Cbk1单克隆抗体的制备方法，该方法的步骤如下：

a)合成氨基酸序列如SEQ ID NO：1或2所示的多肽；

b)将上述多肽导入表达载体，表达并纯化，作为免疫原免疫小鼠；

c)取免疫鼠的脾细胞融合；

d)经多轮筛选出合成多肽反应阳性的细胞克隆，作为抗Cbk1单克隆抗体的杂交瘤细胞株CCTCC No：C201481或CCTCC No：C201482；

e)通过在小鼠体内接种杂交瘤细胞生产腹水抗体，将腹水进行纯化，得到抗Cbk1单克隆抗体。

本发明的第五方面，是提供上述的用于制备抗Cbk1单克隆抗体的多肽在制备Western Blot或免疫组化检测白念珠菌感染的试剂或试剂盒中的应用。

以及，上述的抗Cbk1单克隆抗体在制备Western Blot或免疫组化检测白念珠菌感染的试剂或试剂盒中的应用。

以及，上述的杂交瘤细胞株在制备Western Blot或免疫组化检测白念珠菌感染的试剂或试剂盒中的应用。

进一步地，本发明还提供了上述的用于制备抗Cbk1单克隆抗体的多肽在制备预防或治疗白念珠菌感染药物中的应用。