[发明专利]一种用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及核酸提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可以从各种临床样本中快速提取核酸的工具盒、试剂盒及从临床样本中快速提取核酸的方法。

背景技术

(一)核酸提取

核酸提取已经成为了分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，但是目前核酸的提取方案非常之多，而且繁简不一。分子诊断、核酸测序、功能基因组等相关实验的完成全部依赖核酸的成功提取，传统的操作流程己经可以实现全部的自动化，但这些昂贵的仪器并不能得到大规模的推广使用，我国目前仍是发展中国家，广大的基层医疗单位并不能配备复杂的仪器，因此，提供一种经济性好的核酸提取装置很有必要。

核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，核酸提取的主要步骤为：一、裂解细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子，如提取DNA分子时，应去除RNA，反之亦然，如果是提取RNA和DNA共提取的话，则不需去除任何一种；二、沉淀核酸或者吸附核酸；三、纯化核酸，去除盐类，有机剂等杂质；四、洗脱或溶解核酸，利用洗脱液或者溶解液将核酸洗脱或者溶解。

(二)临床样本前处理

由于样本的处理及保存对DNA和RNA(尤其是RNA)的影响较大，因此在核酸测定时标本的处理及适当保存对测定结果的准确有效非常重要。临床常见的标本有血清(浆)、全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、新鲜组织、石蜡切片等，这些临床标本的处理方法各有不同。

1.血清(浆)标本

加适量的红细胞裂解液(破膜液)，裂解全血中的红细胞；再加适量的细胞核裂液(破核液)，裂解白细胞中的细胞核，使核内DNA释放出来；然后再加SDS(十二烷基硫酸钠)等去污剂，溶解脂蛋白，解聚核蛋白；SDS可与蛋白质结成复合物，使蛋白质变性沉淀，但SDS在以后的核酸提取过程中必须除去。

2.痰标本

痰属于分泌物，临床上常用作结核杆菌DNA测定样本，由于痰标本中含大量粘蛋白和杂质，故在核酸提取时，一定要对标本进行前处理，即用4％NaOH液化，去除粘蛋白，然后用煮沸或蛋白酶、酚/氯仿等经典法提取DNA。

3.棉拭子

用PCR方法检测性病病原体时(衣原体、支原体、淋球菌、梅毒螺旋体、人乳头状瘤病毒等)，临床标本一般为棉拭子。标本取材是关键，衣原体等病原体感染上皮细胞，因此取材一定要取到细胞。具体方法：

加1ml无菌生理盐水，充分震荡混匀，12000rpm，离心5分钟

用棉拭子取尿道分泌物或宫颈分泌物(由医护人员采集)，置无菌试管或EP管内弃上清，沉淀加无菌生理盐水1ml，打匀，12000rpm，离心5分钟

4.体液

体液标本，包括胸水、腹水、脑脊液、尿液等，可直接离心，取沉淀物提取核酸。血性胸腹水，可使用红细胞裂解液处理：

5.脓液

粘稠脓液：同痰标本处理，先用4％NaOH液化，再离心取沉淀提取DNA。

水样脓液：直接离心，沉淀用生理盐水洗2-3次后用于DNA提取。

6.组织

组织有新鲜组织和石蜡切片。新鲜组织的处理步骤：先用生理盐水洗二次，然后将其捣碎或剪碎(用眼科剪)，加蛋白酶K消化后提取核酸；石蜡切片用于核酸提取，需先用二甲苯脱蜡，再用蛋白酶K消化后进行DNA提取。

(三)核酸提取工具及试剂盒

核酸提取已经成为了分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，但是目前核酸的提取方案非常之多，而且繁简不一。分子诊断、核酸测序、功能基因组等相关实验的完成全部依赖核酸的成功提取，传统的操作流程已经可以实现全部的自动化，但这些昂贵的仪器并不能得到大规模的推广使用，我国目前仍是发展中国家，广大的基层医疗单位并不能配备复杂的仪器，因此，提供一种经济性好的核酸提取装置很有必要。

CN101684463A提出一种微量临床样本核酸快速提取装置，由尖口吸管、带膜的过滤器和抽吸装置(注射器或塑料泡)三部分组成，其通过三次抽吸完成核酸吸附、清洗及洗脱过程，能快速简便从样本中提取核酸，然美中不足的是，尖口吸管、带膜的过滤器和抽吸装置三部分组合方式单一且为固定安装，用塑料泡做抽吸装置时(CN101684463A的图2、图3)第三次抽吸进行核酸洗脱实际不能完成(前两次抽吸的废液无法排出，带核酸的洗脱液混在废液中)，而使用注射器做抽吸装置时，带核酸的洗脱液进入注射器不仅会沾染注射器形成生物垃圾，还会导致微量样本中核酸备注射器沾染而损失致使检测不准确。