[发明专利]一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法有效
申请号: | 201410331835.5 | 申请日: | 2014-07-13 |
公开(公告)号: | CN105300783B | 公开(公告)日: | 2019-01-11 |
发明(设计)人: | 陆豪杰;张莹;张程;汪长春;于萌;杨芃原 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | G01N1/40 | 分类号: | G01N1/40;G01N27/62 |
代理公司: | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人: | 吴桂琴 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 糖基化肽段固相 富集 谱分析 方法 | ||
1.一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法,其特征在于,采用氨氧基修饰的磁性纳米材料Fe3O4@ONH2为吸附剂,实现糖基化肽的选择性富集;其包括步骤:
(1)对多肽样品进行高碘酸钠氧化,使糖肽上糖链中的羟基氧化成为醛基;
多肽样品溶于10mM乙酸铵CH3COONH4缓冲液中;多肽样品被10mM的高碘酸钠NaIO4避光氧化1小时,然后加入终浓度为20mM的亚硫酸钠Na2SO3混合10分钟以终止氧化反应;
(2)加入Fe3O4@ONH2材料与多肽溶液充分混合;所述的Fe3O4@ONH2材料表面被氨氧基修饰;
(3)外加磁场,使得磁性材料和溶液分离,收集下层固体相;
(4)用合适的缓冲液清洗材料,每次清洗后外加磁场将材料和溶液分开,收集材料;
(5)用碳酸氢铵缓冲液重新混匀材料,并在其中加入去糖链酶PNGase F充分混合;
(6)外加磁场再次将材料从溶液中分离后,取上清液与有机基质混合,进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析。
2.按权利要求1所述的方法,其特征是,所述步骤(1)中的多肽样品浓度为10ng/μL~1000ng/μL。
3.按权利要求1所述的方法,其特征是,所述步骤(2)中加入的Fe3O4@ONH2材料浓度为1mg/mL-10mg/mL。
4.按权利要求1所述的方法,其特征是,所述的步骤(2)中氨氧基修饰磁性纳米材料进行样品富集的温度是45-60摄氏度,样品富集的时间是1-4小时。
5.按权利要求1所述的方法,其特征是,所述的步骤(4)中用50μL-1mL纯水,80%乙腈水溶液,甲醇和50mM碳酸氢铵NH4HCO3水溶液顺序清洗材料各1次。
6.按权利要求1所述的方法,其特征是,所述的步骤(5)中用50μL-1mL 50mM NH4HCO3水溶液重新混匀材料,按每毫克多肽中加入0.5-1μL去糖链酶PNGase F并保持在37摄氏度混合12-16小时。
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