[发明专利]一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法

权利要求书

1.一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法，其特征在于，采用氨氧基修饰的磁性纳米材料Fe₃O₄@ONH₂为吸附剂，实现糖基化肽的选择性富集；其包括步骤：

(1)对多肽样品进行高碘酸钠氧化，使糖肽上糖链中的羟基氧化成为醛基；

多肽样品溶于10mM乙酸铵CH₃COONH₄缓冲液中；多肽样品被10mM的高碘酸钠NaIO₄避光氧化1小时，然后加入终浓度为20mM的亚硫酸钠Na₂SO₃混合10分钟以终止氧化反应；

(2)加入Fe₃O₄@ONH₂材料与多肽溶液充分混合；所述的Fe₃O₄@ONH₂材料表面被氨氧基修饰；

(3)外加磁场，使得磁性材料和溶液分离，收集下层固体相；

(4)用合适的缓冲液清洗材料，每次清洗后外加磁场将材料和溶液分开，收集材料；

(5)用碳酸氢铵缓冲液重新混匀材料，并在其中加入去糖链酶PNGase F充分混合；

(6)外加磁场再次将材料从溶液中分离后，取上清液与有机基质混合，进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析。

2.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(1)中的多肽样品浓度为10ng/μL～1000ng/μL。

3.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(2)中加入的Fe₃O₄@ONH₂材料浓度为1mg/mL-10mg/mL。

4.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述的步骤(2)中氨氧基修饰磁性纳米材料进行样品富集的温度是45-60摄氏度，样品富集的时间是1-4小时。

5.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述的步骤(4)中用50μL－1mL纯水，80％乙腈水溶液，甲醇和50mM碳酸氢铵NH₄HCO₃水溶液顺序清洗材料各1次。

6.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述的步骤(5)中用50μL-1mL 50mM NH₄HCO₃水溶液重新混匀材料，按每毫克多肽中加入0.5-1μL去糖链酶PNGase F并保持在37摄氏度混合12-16小时。