[发明专利]一种用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法

权利要求书

1.一种用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将固体基片浸于双氧水和浓硫酸体积比为2:5-1:2的混合溶液中，保持0.5-1小时取出后，冲洗干燥待用；

(2)将步骤(1)干燥后的固体基片浸入1-2mg/mL带正电的阳离子聚电解质溶液保持15-30分钟后取出并冲洗干燥；再将其浸入的1-2mg/mL带负电的海藻酸钠溶液保持15-30分钟后取出冲洗干燥；重复以上过程制备自组装多层膜；

(3)将步骤(2)制备的自组装多层膜浸入预先配制的质量百分比为0.5-2％的银氨溶液中，升温至60-80℃温度范围内，保温并搅拌0.5-1小时，制得纳米银薄膜；

(4)将步骤(3)制备的纳米银薄膜浸入1-2mg/mL的带正电的壳聚糖溶液保持15-30分钟，取出冲洗干燥；再将其浸入1-2mg/mL的带负电的聚丙烯酸溶液保持15-30分钟取出并冲洗干燥；重复以上过程得到壳聚糖/聚丙烯酰胺/壳聚糖/聚丙烯酰胺/壳聚糖/聚丙烯酰胺/壳聚糖中间层结构；

(5)将扩增前后的DNA与吖啶类染料分别混合，涂覆于步骤(4)所制备的复合纳米银薄膜表面，保持2-5小时后冲洗干燥；

(6)采用荧光光谱仪测定不同薄膜上吖啶类染料的荧光强度，荧光强度高的为扩增后的DNA,荧光强度低的为未扩增的DNA。

2.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：固体基底为玻璃片、硅片、石英片中的一种。

3.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：选用的带正电的阳离子聚电解质为聚丙烯基氯化铵，聚乙烯亚胺，聚乙烯胺，聚二甲基二烯丙基氯化铵，聚乙烯吡啶，壳聚糖中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：自组装多层膜为双层、三层或三层以上结构。

5.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：将50-100mg壳聚糖加入50ml去离子水中，搅拌并升温至40-50℃温度范围内，随后加入50-100μL醋酸溶液，搅拌12h后过滤，制得壳聚糖溶液浓度为1-2mg/mL。

6.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：待测DNA为双链结构或单链结构。

7.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：选用的吖啶类染料为吖啶黄、吖啶橙及其衍生物中的一种或几种。

8.根据权利要求1所述的用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于：将扩增前后DNA与吖啶类染料混合溶液总体积为80-150μL。