[发明专利]一种针对叶酸代谢基因进行基因分型的试剂盒

权利要求书

1.一种针对叶酸代谢基因进行基因分型的试剂盒，包括PCR反应液和DNA杂交膜条，其特征在于：所述的DNA杂交膜条由基质载体和探针组成，基质载体上依次固定有四种针对MTHFR基因的探针，以及两种针对MTRR基因的探针和两种针对人类基因组设计的探针，所述探针均为能够与上述基因的SNP位点杂交的寡核苷酸序列，所述探针的核苷酸序列分别为：

针对MTHFR基因677C位点的探针T1：5’-GGGAGCCGATTTCATC-3’；

针对MTHFR基因677T位点的探针T2：5’-GGGAGTCGATTTCATC-3’；

针对MTHFR基因1298A位点的探针T3：5’-ACCAGTGAAGAAAGTGTC-3’；

针对MTHFR基因1298C位点的探针T4：5’-ACCAGTGAAGCAAGTGTC-3’；

针对MTRR基因66A位点的探针T5：5’-TCGCAGAAGAAATATGTGAG-3’；

针对MTRR基因66G位点的探针T6：5’-TCGCAGAAGAAATGTGTGA-3’；

针对人类基因组设计的阳性质控探针T7：5’-TTGAACAGGTGGAGGC-3’；

针对人类基因组设计的阴性质控探针T8：5’-TGGCCAGCGTGGACAAC-3’；

上述探针均进行5’端氨基标记以用于与基质载体偶联，上述探针的浓度为5-20uM。

2.根据权利要求1所述的进行基因分型的试剂盒，其特征在于：所述的基质载体上还设置有显色控制探针CC，所述显色控制探针CC的核苷酸序列如下所示：

5’-TTCGGTTGGGCTTTAC-3’，所述显色控制探针CC的5’端进行氨基标记，3’端进行生物素标记。

3.根据权利要求1所述的进行基因分型的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应液中含有扩增包含MTHFR基因677位点、1298位点以及MTRR基因66位点的引物，所述引物的浓度为0.01-0.05uM，所述引物的核苷酸序列如下：

针对MTHFR基因677位点的上游引物M1：

5’-GGAGGACTGCTCACGAACTTCAGTCATGAGCCCAGCC-3’；

针对MTHFR基因677位点的下游引物M2：

5’-GGGACACGCAGTCGACATCGCAAGTGATGCCCATGTC-3’；

针对MTHFR基因1298位点的上游引物M3：

5’-GGAGGACTGCTCACGAACTTGCTTGTGGTTGACCTGG-3’；

针对MTHFR基因1298位点的下游引物M4：

5’-GGGACACGCAGTCGACATCTCCCTTTGCCATGTCCAC-3’；

针对MTRR基因66位点的上游引物M5：

5’-GGAGGACTGCTCACGAACTAGCCCAAGTAGTTTCGAGC-3’；

针对MTRR基因66位点的下游引物M6：

5’-GGGACACGCAGTCGACATCCCACTGTAACGGCTCTAACC-3’。

4.根据权利要求1所述的进行基因分型的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应液中含有扩增包含MTHFR基因677位点、1298位点以及MTRR基因66位点的通用引物，所述通用引物的浓度为0.01-0.05uM，所述通用引物的核苷酸序列如下：

通用上游引物M7：5’-GGAGGACTGCTCACGAACT-3’；

通用下游引物M8：5’-GGGACACGCAGTCGACATC-3’；

所述通用下游引物的5’端进行生物素标记。

5.根据权利要求1所述的进行基因分型的试剂盒，其特征在于：所述的基质载体为玻片或尼龙膜。