[发明专利]生物纳米容器的制备及其在癌症治疗中的应用

权利要求书

1.生物纳米容器的制备及其在癌症治疗中的应用。步骤包括：

(a)修饰有ATP适体的金纳米粒子的合成：首先制备还原性的金胶粒子，将ATP适体DNA2加入到金胶缓冲溶液中混合均匀，在室温条件下摇床避光12h，再静置12h。

(b)Si-MP的合成：将3.5ml2mol/L的NaOH加入到500mlCTAB(1g)的水溶液中，搅拌15min后，在室温下加入5mlTEOS，恒温80℃下大力搅拌2h。反应结束后将白色固体滤出，用甲醇洗净，在真空环境下干燥24h。

(c)Si-MP-NH₂的合成：Si-MP溶于适量甲苯溶液中，混合均匀后，加入8ml3-氨丙基三甲氧基硅烷，恒温80℃搅拌2h。反应结束后滤出固体产品，用乙醇洗净，在烘箱中烘干。

(d)Si-MP-CHO的合成：取0.2gSi-MP-NH₂均匀地溶于5％戊二醛溶液300mL中，常温下搅拌1h。反应结束后将固体颗粒离心分离后再用去离子水洗涤三次，得到产品后在烘箱中将产品干燥。

(e)Si-MP-CHO与荧光素的结合：取0.02gSi-MP-CHO均匀地溶于1mlPBS缓冲溶液中，取500μL所得溶液，加入200μL浓度为10^-4mol/L的荧光素混合均匀，在室温下，置于暗处24h。

(f)Si-MP-CHO与DNA1的结合：取100μL的浓度为10^-7mol/L的DNA1溶液与步骤e中溶液混合，在室温条件下摇床12h，之后再在暗处静置12h。

(g)将a和f两步骤当中所得到的两种溶液混合，室温下静置2h。离心，去除上清液，得到固体产品。用PBS洗涤多次得固体产品。

(h)采用逐级稀释法配制不同浓度的ATP溶液，向ATP溶液加入一份固体，另一份加入无ATP的PBS缓冲溶液以此作为空白对照，于37℃水浴恒温1h。

(i)将所得产品离心，取出上清液，测荧光，得到数据。

(j)材料在细胞中的检测，样品封堵之后取一定量的MCF-7癌细胞与其混合，在荡床中放置1.5h，用激光共聚焦测试样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中还原性金纳米粒子的制备还原剂可采用柠檬酸三钠等。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(b)中所得固体用甲醇清洗。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(c)中在制备Si-MP-NH₂时，加入3-氨丙基三甲氧基硅烷。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(c)中在制备Si-MP-NH₂时，加入3-氨丙基三甲氧基硅烷后要在80℃恒温下反应2h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(d)中在制备Si-MP-CHO时，加入戊二醛后反应1h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(g)中利用金胶和DNA来封闭硅基介孔材料。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(h)中，ATP的作用是打开DNA双链。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(j)中，使用荧光共聚焦看样品成像。