[发明专利]一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及胆固醇的测定技术领域，尤其涉及一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒。

背景技术

人体血液中的胆固醇除了游离胆固醇，大部分与极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等脂蛋白结合成脂蛋白胆固醇形式存在。其中，HDL亦称为a1脂蛋白，比较富含磷脂质，在血清中的含量约为300mg/dl。其蛋白质部分，A－I约为75％，A－II约为20％。HDL接受来自于包括动脉壁的各组织的胆固醇，通过直接逆转运或间接逆转运，将其运入肝脏，再清除出血液，因此HDL与积累于细胞内的胆固醇的除去作用相关。因此高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的等各种动脉硬化症的危险预防因子(呈负相关)，其在血液中的水平对动脉硬化性疾病的诊断有特异的辅助作用。

HDL-C增高最主要的临床价值是能够将动脉粥样硬化斑块的泡沫细胞转移至肝脏排出体外，可见于原发性高密度脂蛋白血症(家族性高α-脂蛋白血症)，并发现此群家族中长寿者多。接受雌激素胰岛素或某些药物(如烟酸、维生素E，肝素等)治疗者，亦可增高，虾青素可显著提升人类高密度脂蛋白胆固醇。高密度脂蛋白胆固醇降低常见于脑血管病冠心病、高甘油三酯血症、肝功能损害如急慢性肝炎、肝硬化、肝癌、糖尿病、吸烟、缺少运动等其降低可作为冠心病的危险指标。因此，体内高密度脂蛋白胆固醇浓度测定对诊断冠心病、心脑血管病、肝炎、肝硬化等疾病具有一定的参考意义。

目前HDL-C含量测定在临床试验中已经常规化。美国胆固醇教育计划(NCEP)对HDL-C测定的建议中指出：HDL-C测定的准确性非常重要，因为HDL-C在一个很窄的浓度范围内与冠心病呈负相关；CHD危险增高的界限是在HDL-C浓度范围的低端，测定的细小误差会产生相对大的影响。

测定高密度脂蛋白胆固醇的方法很多，目前市场上流通的主要是匀相测定法，包括PEG修饰酶法、选择抑制法、清除法和免疫分离法。

PEG修饰法是用PEG修饰改性胆固醇酯酶(CEH)和胆固醇氧化酶(COD)，修饰酶对脂蛋白的结构具有选择性，其次序是LDL＜VLDL＜CM＜HDL；另外葡聚糖、α-环糊精硫酸盐(α-SCD)和Mg²⁺与非HDL形成复合物，可以避免修饰酶对非HDL的作用，因此在葡聚糖、Mg²⁺、α-环糊精硫酸盐和修饰酶作用下可以直接测定HDL-C。

选择抑制法(PPD法)是在R1(第一试剂)中含表面活性剂I(HDL-C的反应抑制剂)、聚阴离子和某种盐，乳糜微粒(CM)、VLDL、LDL在多聚阴离子—盐环境下发生凝聚，同时表面活性剂Ⅰ与凝聚的脂蛋白的疏水集团有高度亲和力，能吸附在凝聚的脂蛋白的颗粒表面形成遮蔽，抑制非HDL-C的反应，同时，HDL上也有表面活性剂I，但由于亲和力较弱，反应时可逆的；R2(第二试剂)中含有对HDL亲水基团有高度亲和力的表面活性剂II(HDL-C的反应促进剂)，其对HDL的吸附不仅置换出第一反应中与HDL亲和的表面活性剂I，还能使HDL形成可溶性复合物，使HDL-C参与反应。

清除法是利用表面活性剂对脂蛋白的亲和性差异。在R1(第一试剂)反应促进剂(表面活性剂I)的作用下，血清中非HDL形成可溶性复合物，可溶性复合物表层的游离胆固醇在COD催化下反应生成H₂O₂，通过过氧化物酶(POD)(或过氧化氢酶(CAT)，R1中不加POD，不加叠氮钠)除去H₂O₂；然后，加入R2(第二试剂)，在特殊选择性表面活性剂作用下，只有HDL可溶，所释放的胆固醇在胆固醇酯酶(CEH)和COD作用下，生成H₂O₂，通过POD(如果R1中用CAT除去H₂O₂，则R2中要添加叠氮钠抑制其作用)、4-AAP和色原，发生显色反应，直接测定HDL-C。