[发明专利]一株高产尼莫克汀的产色链霉菌及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高大环内酯类抗生素产量的方法，具体涉及一株高产尼莫克汀的产色链霉菌及其筛选方法。 

背景技术

尼莫克汀是由产色链霉菌或者蓝灰链霉菌发酵产生的一种十六元环大环内酯类抗生素，它主要用于合成亲脂性更强的莫西克汀。从结构上来看，尼莫克汀属于大环内酯类抗生素，这类聚酮结构物质的生物合成过程呈现相似的规律，它是由7个乙酸盐单位，6个丙酸盐单位和一个2-甲基丙酸盐单位，通过聚酮体(多聚乙酰)途径不断缩合而成。构成尼莫克汀的原子全部来源于糖代谢后产生的支链脂肪酸、乙酸盐及丙酸盐，乙酸钠为尼莫克汀的一种前体诱导物质，如果能够筛选到一株能够耐受高浓度乙酸钠的突变株，且该突变株能够直接利用乙酸钠做为合成前体诱导物，可以大幅提升尼莫克汀的产量，对尼莫克汀的工业生产具有重要意义。 

发明内容

本发明为解决现有技术中的不足，发明了能够耐受高浓度乙酸钠的一株高产尼莫克汀的产色链霉菌，而且本发明还提供了其筛选方法。 

本发明为实现其目的采用的技术方案是： 

一株高产尼莫克汀的产色链霉菌，分类名称为产色链霉菌(Streptomyces cyanneorisens)DC18-01，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会，保藏编号为CGMCC No.6217，保藏日期为2012年6月14日。 

一种如所述的一株高产尼莫克汀的产色链霉菌的筛选方法，包括以下 操作步骤： 

a、出发菌株斜面培养：以砂土管保藏的产色链霉菌为出发菌株，使用无菌接种针蘸取少量砂土孢子，划线接种于试管斜面培养基中，于26-30℃、30％-60％湿度条件下培养96-144h，得到斜面菌种； 

b、制备孢子液：用15-20mL无菌水将步骤a制备的斜面菌种洗下制成孢子液； 

c、紫外线诱变筛选：取5mL步骤b制备的孢子液于灭菌的培养皿中，于波长254nm、功率30W的紫外灯下30cm处垂直照射120s，照射后立即用无菌锡纸包住，避光静置15min，使用无菌水将紫外线照射过的孢子液稀释至孢子液10^-2-10^-8，取稀释后的孢子液0.1-0.3mL涂布于含有乙酸钠浓度为0.1-0.5mg/L的固体培养基中，26-30℃、30％-60％湿度条件下培养96-144h，得到成熟的单菌落； 

d、斜面培养：将步骤c培养成熟的单菌落划线转接至斜面培养基中，于26-30℃、30％-60％湿度条件下培养96-144h，得到斜面孢子； 

e、种瓶培养：挖取2-5cm²步骤d制备的斜面孢子接种于种瓶培养基中，于26-30℃，220-240rpm震荡培养24-30h得到成熟种液； 

f、对照菌液的制备：以砂土管保藏的的产色链霉菌为出发菌株，依次经过步骤a、步骤b、步骤d、步骤e得到对照菌液； 

g、发酵摇瓶筛选：以体积比2％-8％的接种量将步骤e制备的成熟种液转接至含有的乙酸钠浓度为0.05-0.2mg/L的发酵培养基中，于26-30℃、220-240rpm震荡培养240-288h，检测效价，以体积比2％-8％的接种量将步骤f制备的对照菌液接种至不含乙酸钠的发酵培养基中，于26-30℃、220-240rpm震荡培养240-288h，检测效价，选取检测效价高于对照菌液 的斜面，向其中加入1mL无菌水，用接种针刮下斜面孢子，制成孢子悬液，吸取0.2mL孢子悬液至空白砂土管中，在-750-760mmHg柱条件下干燥4-6h后于2-8℃冰箱中砂土保藏，得到保藏菌株； 

h、菌株复试：取步骤g筛选的砂土保藏的砂土孢子划线接种于斜面培养基中，于26-30℃、30％-60％湿度条件下培养96-144h；挖取2-5cm²斜面孢子接种于种瓶培养基中，于26-30℃、220-240rpm震荡培养24-30h，得到复试菌株成熟种液；取出发菌株的砂土孢子作相同处理，得到出发菌株成熟种液，以体积比2％-8％接种量将复试菌株成熟种液转接至含有的乙酸钠浓度为0.05-0.2mg/L的发酵培养基中，以体积比2％-8％接种量将出发菌株成熟种液转接至不含有乙酸钠的发酵培养基中，于26-30℃、220-240rpm震荡培养240-288h，检测效价，并进行效价对比；