[发明专利]用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜的制备方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求享有2013年7月9日提交的日本专利申请P2013-143371和2014年5月14日提交的日本专利申请P2014-104225的优先权，这两件申请的全部内容在此以引用方式并入本文。

技术领域

本发明涉及一种用于细胞培养和癌细胞生长抑制的至少一种应用的聚氨酯多孔膜的制备方法。

背景技术

作为可用于包括药物发现和再生医学在内的多种领域的技术，细胞培养技术近来受到了关注。将作为细胞支架(cell scaffold)的基材(substrate)用于贴壁依赖性细胞的培养。关于细胞培养所使用的基材，如本领域已知的，基材表面上的微小物理结构以及化学性质很重要。已知基材之一是这样一种基材，其由聚合物材料制成，并且在表面上具有微小的凹凸体。可以采用多种技术来提供带有微小凹凸体的、由聚合物材料制成的基材，例如，缩合技术、纳米压印技术、光刻或乳胶技术(例如，JP2009-242495A)。

发明内容

然而，细胞培养基材的现有生产方法都是相当复杂的，并且需要许多步骤，因此难以降低制造成本。另外，现有技术方法通常难以制备具有贯通至下表面的孔的多孔膜。在细胞培养使用具有通孔的多孔膜的情况下，多孔膜的上表面和下表面二者都能用于细胞培养。例如，在上前表面和下表面上可以培养不同类型的细胞。这会扩大细胞培养技术的应用。为此目的，需要开发一种具有通孔的细胞培养片材。尤其是，尚未有已知的方法来制备具有孔径小于10微米的通孔的细胞培养用多孔膜。由于标准细胞尺寸为大约10微米，希望使用具有孔径小于10微米的通孔的多孔膜，以允许对不同类型细胞之间的相互作用进行分析。因此，需要开发具有孔径小于10微米的通孔的多孔膜。

已知的是，一些在其上表面上形成有微小凹凸体的多孔膜对细胞生长抑制是有效果的(例如，JP2005-152526A)。希望对癌细胞生长抑制具有效果(作为对细胞生长抑制的效果的一个例子)的多孔膜能够用于癌症治疗，用于抑制癌症复发或癌症转移，或者用于癌症研究。因此，需要通过简单的制造工艺来生产具有这种对细胞生长抑制效果的多孔膜。

为了解决上述问题中的至少一部分，通过以下方面和实施方式完成了本发明。

(1)根据一个方面，提供了一种用于细胞培养和癌细胞生长抑制中的至少一种应用的聚氨酯多孔膜的制备方法。这种聚氨酯多孔膜的制备方法包括：第一步骤，在基材上形成未固化的聚氨酯材料层；以及第二步骤，向形成于基材上的聚氨酯材料层中远离基材的暴露表面供给水蒸汽，以使聚氨酯材料固化，并且向聚氨酯材料层提供具有位于暴露表面上的多个凹凸体的多孔结构。

根据本方面的用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜的制备方法，该方法通过向聚氨酯材料层供给水蒸汽这样的简单工艺，制备了用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜。这有利地降低了聚氨酯多孔膜的制造成本。

(2)根据(1)所述的用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜制备方法的一个实施方案，在第二步骤中所提供的聚氨酯多孔膜的多孔结构可以包括向暴露表面开放的多个孔，并且仅有单一的孔沿聚氨酯多孔膜的膜厚度方向存在。根据本实施方案的聚氨酯多孔膜的制备方法能够制备适于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜。

(3)根据(2)所述的用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜制备方法的另一实施方案，聚氨酯多孔膜可以具有0.1～100微米的厚度。根据本实施方案的聚氨酯多孔膜制备方法，使得能够制备适于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜。

(4)根据(3)所述的用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜制备方法的另一实施方案，通过对条件进行调节，可以将聚氨酯多孔膜的厚度控制到0.1～100微米，所述条件选自：第一步骤中形成为层的聚氨酯材料的组成，第二步骤中的反应温度，以及第二步骤中的反应时间。根据本实施方案的聚氨酯多孔膜制备方法能够容易地制备适于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜。

(5)根据(2)所述的用于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜的制备方法的另一实施方案，聚氨酯多孔膜在暴露表面上可以具有0.1～100微米的平均孔径。根据本实施方案的聚氨酯多孔膜的制备方法能够制备适于细胞培养和癌细胞生长抑制中至少一种应用的聚氨酯多孔膜。