[发明专利]拟香味类香味菌及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物菌种技术领域，尤其是一种拟香味类香味菌，及其制备方法和应用。

背景技术

链格孢菌(Alternaria alternate(Fries)Keissler)是一类重要的植物病原菌，寄主范围广，危害重，其引起的烟草赤星病是烟叶成熟后期重要的叶部病害，在我国各烟区均有发生，直接影响了烟叶的产量和质量。关于烟草赤星病的防治，目前国内主要以化学防治为主，但使用化学农药防治赤星病既导致农药残留、环境污染，又可引起病菌产生抗药性以及严重的烟株药害。生物防治由于其对环境友好而被认为是替代化学杀菌剂防治植物病害的良好途径，因此生防资源的筛选、利用和创新对于植物病害的生物防治具有重要意义。

微生物代谢产生的挥发性产物常具有抑菌、防病或兼具促生及诱导抗性等作用，是一类重要的生防资源。McCain于1966年最早报道了灰色链霉菌(Streptomyces griseus)对Gleospriumaridum孢子形成具有抑制作用；Chen等研究发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的挥发物能强烈抑制灰霉病菌(Botrytis cinerea)孢子萌发和萌发管伸长；Koitabashi分离到的Irpexlacteus产生的挥发物对Oiduim sp.引起的温室欧芹白粉病防治效果良好；Zhang等发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GB03的挥发物能通过增强拟南芥(Arabidopsis)的光合作用对其产生促生作用。与非挥发性抗菌物质相比，挥发性抗菌物质具有渗透力强、分布均匀等优点，防治作物病害效果更为突出、应用领域更为广阔；已有研究表明，包括真菌、细菌在内的很多微生物都能产生挥发性抗菌物质。

生物防治由于其对环境友好，且具有良好的防治效果，近年来成为防治植物病害的研究热点。拮抗微生物是一类重要的生防资源，其产生的拮抗物质主要包括非挥发性代谢产物和挥发性代谢产物两种。目前，对于烟草赤星病菌的生物防治大多集中在产非挥发性抗菌物质微生物的筛选和利用，而对于产挥发性抗烟草赤星病菌代谢产物微生物的研究则较少。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提出一种拟香味类香味菌，对烟草赤星病有较好的抑制和治疗效果。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种拟香味类香味菌(Myroidesodoratimimus)的T45菌株，2014年4月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC9116。

一种如上所述拟香味类香味菌T45菌株的制备方法，包括以下步骤：

(1)取烟草根际土壤，加入蒸馏水，摇动片刻，吸取上层液加入到无菌水中，制成悬液；

(2)取步骤(1)土壤悬浊液滴加到含2～5％利福平的LB固体培养基平板上，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于28℃恒温培养箱培养1～2天。

优选的，所述LB固体培养基配方为：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L和琼脂粉15g/L。

优选的，(3)步骤(2)培养液涂布于LB固体培养基上28℃培养24h活化，划线于LB肉汤培养液中28℃，150rpm震荡培养24h。

一种如上所述拟香味类香味菌T45菌株在对烟草赤星病菌的抑制方面的应用。

优选的，包括以下步骤：

①.T45菌株的培养：取烟草根际土壤，加入蒸馏水，摇动片刻，吸取上层液加入到无菌水中，制成悬液；取土壤悬浊液滴加到含2～5％利福平的LB固体培养基平板上，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于28℃恒温培养箱培养1～2天；分离到67株细菌，编号T1-T67，涂布于LB培养基上28℃培养24h活化，划线获得单菌落，挑取单菌落于LB肉汤培养液中28℃，150rpm震荡培养24h；

②.病原菌培养：烟草赤星病菌边缘的菌丝块置于新鲜PDA培养基上25℃培养7d进行活化；

③.接种：在步骤②长满烟草赤星病菌的培养基上获得菌丝块，将其接种到PDA培养基平板上25℃培养12h；吸取步骤①细菌培养液均匀涂布于LB固体培养基平板上；将PDA培养基平板对扣置于LB固体培养基平板上方，并用封口膜密封两块平板边缘，于25℃下培养5-7天。

优选的，所述LB固体培养基配方为：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L和琼脂粉15g/L。