[发明专利]一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种抗原宏阵列，具体来说是一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列。

背景技术

食品安全是关系国计民生的重大公共安全问题，也是国家行政机关监管工作的重点之一。近年来国内食品安全事故层出不穷，而食源性致病菌污染是食品安全中最常见的问题。据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)报道，全球每年发生腹泻病的病例数高达1.5亿，其中70％病例与各种致病性微生物污染的食品有关。我国CDC的研究资料也显示，微生物是食源性疾病的主要病原，占46.4％。所以，食品中的致病菌污染在国内外都是影响食品安全的最主要原因。就食源性致病菌检测而言，标准方法包括生化鉴定、分子生物学鉴定、免疫学鉴定三大技术体系。而免疫学检测体系的建立又依赖于大量高灵敏度、高特异性的致病菌单克隆抗体。目前，市面上所售的单克隆抗体较为昂贵，这显然制约了该检测体系的建立与发展，其中原因是，单克隆抗体的制备步骤繁琐、杂交瘤细胞的筛选周期长等。

单克隆抗体技术，是指将某种抗原诱导产生的特异性B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经融合，形成杂交瘤细胞，并分离筛选出单个杂交瘤细胞，再将其扩增，最终分离纯化制得单克隆抗体。杂交瘤细胞具有双重特性，既能如骨髓瘤细胞般持续繁殖，又能如B淋巴细胞般分泌针对单一抗原决定簇的特异性抗体，即单克隆抗体。尽管单克隆抗体越来越广泛地应用于各个研究领域，但是自1975年问世以来，制备单克隆抗体一直沿用传统方法，成为这一经典技术发展的瓶颈。制备单克隆抗体包括抗原制备、动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选、亚克隆、冻存复苏、杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定以及单克隆抗体的大量生产等一系列复杂步骤，一般要花费6个月以上的时间。其中杂交瘤细胞的筛选这一步骤最为耗时。

目前筛选单克隆抗体杂交瘤细胞，都是采用间接酶联免疫法(间接ELISA法)筛选出无交叉反应、高灵敏度的杂交瘤细胞，而且实验人员需要丰富的经验。就食源性致病菌杂交瘤细胞特异性筛选这一试验，通常需要对实验前期所获得的几十株杂交瘤细胞的几十种致病菌抗原及致病菌抗原类似物进行交叉反应的试验。即把靶抗原以及不能有交叉反应的靶抗原类似物包被在96孔酶标板上，逐一用融合后的阳性杂交瘤细胞去筛选每种抗原，选择那些只针对靶抗原有阳性反应，而放弃那些和靶抗原反应弱，或者和靶抗原类似物有交叉反应的杂交瘤细胞。而且要获得特异性高、亲和力高、稳定性好的杂交瘤细胞通常需要3、4轮的筛选，这种逐一筛选的方法将耗费大量时间。就食源性致病菌单克隆抗体的制备来说，在杂交瘤细胞制备过程中，通常一次融合，一般会有1000多孔杂交瘤细胞，融合较好的时候100％的孔里都有杂交瘤细胞生长，但是最终只有不到10％的孔里面含有目标杂交瘤细胞，所以要从如此多的杂交瘤细胞中筛选出目标杂交瘤细胞，其筛选量是非常巨大的。一轮筛选通常需要对几十种致病菌抗原及致病菌抗原类似物进行交叉反应测试，需要进行几十次间接ELISA实验，花费数周时间，这大大增加了食源性致病菌单克隆抗体的制备周期，也增加了生产成本。最终，限制了食源性致病菌单克隆抗体制备技术的发展以及相关免疫学鉴定技术体系的建立与发展。

抗原宏阵列是生物芯片的一种，其是将多种免疫杂交反应中的抗原成分固定于一张基片上所制成的生物芯片，可用来进行类似间接酶联免疫分析反应。

发明内容

针对上述现有食源性致病菌杂交瘤细胞筛选技术中存在的缺陷，本发明提供了一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列，所述的这种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列要解决现有食源性致病菌杂交瘤细胞筛选技术成本高、筛选过程耗时、复杂、繁琐的技术问题。

本发明一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列，包括一个基片，所述的基片上固定有致病菌、阳性对照和阴险对照，所述的致病菌为金黄色葡萄球菌、出血性大肠杆菌O157：H7、单核细胞增生李斯特菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、福氏志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、副溶血性弧菌、阪崎肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌中的任意一种或者一种以上的组合。