[发明专利]结核分枝杆菌药敏指示剂的使用方法

说明书

技术领域

 本发明涉及对结核分枝杆菌的耐药性进行试验的医学检验领域，具体为一种结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法。

背景技术

结核病的耐药性是一个日益严重的公共卫生问题，严重威胁着结核病的控制。中国工程院院士钟南山在两会期间曾称，中国其有450万活动性结核病人，带菌者高达5.5亿，而带菌者一生中有10％的可能性会发病。2009年4月，中国卫生部部长陈竺在北京举行的“耐多药／广泛耐药结核病高负担国家”部长级会议上通报了中国耐药结核病的情况：中国疾病防控中心的抽样调查显示，中国结核病人中，耐多药发病率为8.32％，总计约为12万人，居世界第二位，广泛耐药发病率为0.68％，总计大约1万人，其危害远远超过艾滋病。药敏试验是对结核分枝杆菌的耐药性进行检测的重要试验。现有的结核分枝杆菌药敏试验方法，一般有纸片检验法和浓度检验法。纸片检验法是通过观察由于贴在固体培养基表面上药物纸片形成的药物抑菌圈来确定结核分枝杆菌对药物的敏感性；浓度检验法是通过观察检测不同药物和不同药物浓度试验容器中结核分枝杆菌的生长情况来确定结核分枝杆菌对药物的敏感性。不管是纸片检验法还是浓度检验法，其整个药敏试验过程一般可分为标本前处理、增殖或分离培养和药敏检验三个阶段。现有的纸片检验法，标本前处理阶段的步骤为：①用吸管吸取提供的标本置于试验容器中；②向试验容器中加入消化液，对标本粘液进行消化，使标本中粘液和杂质包裹的细菌充分暴露；③离心分离，倒掉上清液，获得浓集的标本；在获得浓集的标本后再进行增殖或分离培养。增殖或分离培养阶段的步骤为：④取已经浓集的标本少部分制成浓菌液；⑤将浓菌液接种于固体培养基例如罗氏培养基上进行增殖或分离培养，一般需在37℃培养箱中培养1月左右，把单个细菌培养成细菌菌落；在获得细菌菌落后再进入药敏检验阶段。药敏检验阶段的步骤为：⑥取少量的细菌菌落，一般是取1――3个细菌菌落，将其溶解分散制成浓菌液；⑦将浓菌液接种于固体培养基例如琼脂培养基表面上；⑧在固体培养基表面上贴上药物纸片；⑨放入37℃培养箱中培养1个月左右，观察药物抑菌圈，确定结核分枝杆菌对药物的敏感性。现有的纸片检验法的优点是操作方便、设备简单、投资小；但其存在以下缺点：⑴整个检验所需的时间太长：增殖或分离培养阶段需要1个月左右，药敏检验阶段大约需要1个月左右，整个试验过程大约需要2个月左右。如果在药敏试验得到结果后再使用药物治疗，就会严重影响治疗时机。而临床上在没有药敏试验的情况下使用药物治疗一是可能会造结核分枝杆菌耐药的严重后果；二是对感染耐药性结核分枝杆菌的结核病患者很难达到好的治疗效果。⑵不安全。整个试验需要两次人工接种，由于结核分枝杆菌具有传染性，这样对操作人员形成安全隐患，对环境形成污染隐患。

现有的浓度检验法，其在增殖培养阶段采用固体培养基，其标本前处理、增殖或分离培养二个阶段的步骤与现有的纸片检验法相同，但药敏检验阶段的步骤与现有的纸片检验法不同，具体为：从固体培养基上取增殖或分离培养获得的细菌菌落，一般是取1个或数个细菌菌落，→→将其溶解分散制成菌悬液→→将菌悬液倒入按不同的药物和不同的浓度配制成的多个试验容器中，制成对比试验标本→→观察检测试验容器中细菌生长情况，确定结核分枝杆菌对药物的敏感性。这种检验方法的优点是设备简单、投资小；但其存在以下缺点：⑴所需的时间长。增殖或分离培养阶段的方法和步骤与现有的纸片检验法的方法和步骤相同，因此，仅增殖或分离培养阶段所需的时间就需要1个月左右；⑵操作麻烦、不安全且容易造成错误的检验结果。由于需要配制多个试验容器，配制过程很麻烦且不安全，对操作人员形成安全隐患，对环境也形成污染隐患；在配制多个试验容器过程中比较容易被其他细菌污染，这样就可能造成错误的检验结果。

此外，还有利用仪器鉴定药物敏感性的方法，例如BACTEC —TB460系统及BACTEC 960系统，其优点是操作简单，试验过程时间短，平均检出时间为14.4天,最快10天左右。但其存在的主要缺点是仪器设备的价位高，投资大；使用成本高，一是仪器设备的使用成本高，二是需要多个对比试验标本，试剂的成本较高，其费用较大，一般医院难以承受，难以推广普及。

从上面详细分析现有的结核分枝杆菌药敏试验方法可以看出，现有的纸片检验法和浓度检验法存在以下缺点：（1）整个检验过程所需的时间长。（2）操作麻烦。（3）不安全。（4）容易出现误检。而利用仪器鉴定药物敏感性的方法投资大，使用成本高，难以推广普及。

发明内容

本发明的目的是提供一种能缩短结核分支枝杆菌药敏试验过程所需时间的结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法。