[发明专利]HPLC-ELSD法对贝羚胶囊中猪去氧胆酸的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种含量测定方法，具体涉及一种HPLC-ELSD法对贝羚胶囊中有效成分猪去氧胆酸的含量测定方法，属于药物质量标准、分析化学以及药物分析的技术领域。

背景技术

现有质量标准中贝羚胶囊中有效成分猪去氧胆酸的含量测定方法是薄层色谱扫描。

薄层扫描有其自身的一些缺陷，包括重复性差，受到各种干扰多，不够灵敏等。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种HPLC-ELSD法对贝羚胶囊中有效成分猪去氧胆酸的含量测定方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。适用于药物质量标准、分析化学以及药物分析的技术领域。

1、HPLC-ELSD法与薄层色谱法比较更简便，准确，灵敏度高，重现性好。作进一步优化了国家标准质控指标的检测方法，建立了猪去氧胆酸的含量测定方法，确定质量标准项目和限度范围，完成质量标准提升工作提高其质量标准，最终形成更加全面、严格的内控质量标准，做到质量可控，以保证临床使用的有效性和安全性。

2、将原有的质量标准中贝羚胶囊中有效成分猪去氧胆酸的含量测定方法薄层色谱扫描，改变成更加简便，准确，灵敏度高，重现性好的HPLC-ELSD法。

3、由于指标成分猪去氧胆酸在紫外区吸收较小，在近紫外区测定时色谱基线漂移很大，不易作定量用，故选择用蒸发光散射检测器，在上述的漂移管温度和气流下，色谱有稳定的基线，灵敏度高，适合用于定量分析。

贝羚胶囊主要功效为清热化痰，止咳平喘。用于痰热肺阻，气喘咳嗽，小儿肺炎，喘息性支气管炎及成人慢性支气管炎见上述证候者。

贝羚胶囊的制备工艺：

(1)按照贝羚胶囊处方准备原料：

川贝母、羚羊角、猪去氧胆酸、人工麝香、沉香、人工天竺黄(飞)、煅青礞石(飞)、硼砂(炒)以上八味；

(2)原料的粉碎：

羚羊角搓成细粉；

人工天竺黄和煅青礞石分别粉碎成细粉；

川贝母、猪去氧胆酸、人工麝香、沉香、硼砂(炒)五味分别粉碎成细粉；

(3)制粒：

除煅青礞石外，其余7味的细粉与淀粉混匀，分次加入青礞石细粉中，配研均匀，制成颗粒，过筛；

(4)制胶囊：

再加硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，即得。

其中步骤(1)中，按照重量份数计，所述川贝母、羚羊角、猪去氧胆酸、人工麝香、沉香、人工天竺黄(飞)、煅青礞石(飞)、硼砂(炒)。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

作为本发明的第一方面，一种HPLC-ELSD法对贝羚胶囊中猪去氧胆酸的含量测定方法，其特征在于，包括：

(1)样品的准备

准备猪去氧胆酸和贝羚胶囊样品，将贝羚胶囊制备成溶液供试溶液；

(2)高效液相色谱

色谱柱，流动相为乙腈-0.05％～0.15％酸溶液，二者重量百分比为50～75:25～50；流速1.0ml·min^-1；进样体积20μl；

(3)检测

ELSD检测器以空气为载气，漂移管温度从90℃开始，每5℃检测一次，空气流速为1.7～3.0L·min^-1，以猪去氧胆酸峰面积计算，分离度不低于2.0，理论塔板不低于3000。

步骤(1)还包括样品前处理，采用75％甲醇溶剂50ml，超声提取20min。

步骤(1)中，贝羚胶囊制备成溶液供试溶液进一步包括：取贝羚胶囊内容物，混匀，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中；精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量；用75％甲醇再补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

步骤(2)中，所述色谱柱为Inertsil ODS-3，规格为4.6×150mm，5μm；Agilent XDB-C18，规格为4.6×250mm，5μm；以及Kromasil100-5C18规格为4.6×150mm，5μm。优选为Kromasil100-5C18(4.6×150mm，5μm)色谱柱。

步骤(2)中，所述流动相乙腈：0.1％酸溶液二者重量百分比为50:50；所述酸为磷酸、冰乙酸、甲酸的水溶液作水相体系。

步骤(2)中，所述色谱柱的温度为25℃～35℃。25℃下的理论塔板数最高，分离度高，优选为25℃柱温。

步骤(2)中，所述漂移管温度90℃较佳。