[发明专利]一种检查布洛芬原料细菌内毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及细菌内毒素的检查方法，具体的说是涉及一种检查布洛芬原料细菌内毒素的方法。

背景技术

布洛芬具有抗炎、镇痛、解热作用。适用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊椎炎和神经炎等。细菌内毒素是注射剂药品中的主要污染物质，大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”，危害人体健康，甚至危及生命，故注射剂需要检查细菌内毒素。布洛芬作注射剂药物的原料时，应进行细菌内毒素的检查控制，为了临床安全用药，内毒素限值L控制在0.035EU/mg。按张德波在“布洛芬细菌内毒素检查法研究”文献（中国现代应用药学2012，29（3）：261～264）中报道的检查布洛芬细菌内毒素的方法：布洛芬样品中加入1.5倍量无内毒素的无水碳酸钠，用细菌内毒素检查用水溶解后检查内毒素，该方法的内毒素限值L为0.20EU/mg。当布洛芬内毒素限值L为0.035EU/mg，采用张德波的文献方法检测，供试品阳性对照呈阴性，说明供试品溶液干扰细菌内毒素的检查。布洛芬在水中几乎不溶，在乙醇中易溶，但是乙醇会干扰细菌内毒素的检查。因此需要采用一种既能溶解样品，又能使供试品溶液不影响内毒素检查的方法进行用于注射剂产品的布洛芬原料的细菌内毒素检查。

发明内容

本发明目的在于提供一种检查布洛芬原料的细菌内毒素的方法，以解决现有技术存在的问题。

本发明的细菌内毒素检查方法，包括以下步骤：称取布洛芬原料和1/4～1/2倍量无内毒素的无水碳酸钠，用15～45%（v/v）的乙醇溶液制成不低于14.28mg/ml的布洛芬溶液，再用细菌内毒素检查用水稀释制备各灵敏度鲎试剂对应的布洛芬溶液，然后参照《中国药典》2010年版附录细菌内毒素检查法中的凝胶法检查。

本发明人经反复研究发现，采用15～45%（v/v）的乙醇溶液和1/4～1/2倍量无内毒素的无水碳酸钠既可解决布洛芬原料的溶解性问题，又能避免样品溶液对布洛芬内毒素检查的干扰，可以用于检查内毒素限值L为0.035EU/mg的布洛芬原料。

本发明提供的布洛芬细菌内毒素检查法，操作简便，灵敏准确，完全能满足布洛芬作为注射剂原料检查细菌内毒素的要求。

具体实施方式

实施例1

1仪器与试药

1.1仪器

电热恒温水浴锅(上海仪表集团供销公司)、XW-80A旋涡混合器（上海青浦沪西仪器厂）、洁净工作台（HENGZI）、电热鼓风干燥箱（重庆永恒实验仪器厂）、电子天平（sartorius），试验所用玻璃器皿均在250℃烘烤2h，以去除可能存在的外源性细菌内毒素。

1.2试药

鲎试剂（TAL，湛江安度斯生物有限公司，0.1ml/支，灵敏度0.25EU/ml，批号：1206201；湛江博康海洋生物有限公司，0.1ml/支，灵敏度0.25EU/ml，批号：1206130；湛江安度斯生物有限公司，0.1ml/支，灵敏度0.06EU/ml，批号：1207082；湛江博康海洋生物有限公司，0.1ml/支，灵敏度0.06EU/ml，批号：1207131）；细菌内毒素工作标准品(CSE，中国药品生物制品检定所，规格:120EU/支，批号：150601-201072)；乙醇；无水碳酸钠；细菌内毒素检查用水(BET水，湛江安度斯生物有限公司，50ml/瓶，批号：1010140)；布洛芬原料(市售)。

2布洛芬原料的细菌内毒素限值的确定

布洛芬内毒素限值L计算，L=0.375EU/mg（K=5EU/kg·h，M=13.33mg/kg·h)，根据制成的布洛芬注射液的内毒素的限度，并考虑到还有加入其他辅料，为了保证布洛芬注射液的临床用药的安全性，将原料药的细菌内毒素限值定为L=0.035EU/mg。

3最小有效稀释浓度（MVC）的计算

最小有效稀释浓度计算公式为:MVC=λ/L，其中L为供试品的细菌内毒素限值，布洛芬原料的L为0.035EU/mg。λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度，当λ为0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml或0.03EU/ml时，相对应的最小有效稀释浓度如表1：

表1最小有效稀释浓度