[发明专利]一种检测乳腺癌标志物AnnexinA1抗原表位氨基酸序列及应用

说明书

  

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，是一种用于制备肿瘤早期诊断试剂和开发治疗肿瘤的靶向药物。 

背景技术

大量研究表明，血清或血浆中的肿瘤相关抗原能诱导机体产生自身抗体，在肿瘤患者血清中既存在肿瘤抗原，也存在针对该肿瘤抗原的自身抗体。因此， 既可以利用抗体检测肿瘤抗原，也可以利用抗原检测肿瘤抗原的自身抗体，但利用肿瘤自身抗体检测肿瘤的特异性和敏感性均比利用肿瘤抗原检测肿瘤要高得多。很多肿瘤相关抗原不仅在肿瘤患者体内存在，在正常人体内也存在，因此检测肿瘤相关抗原作为诊断依据可信性差。而肿瘤自身抗体在正常人体内含量很低检测不到或根本不存在，若体内肿瘤自身抗体水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相关抗原水平发生波动，预示疾病的存在或原有疾病加重。 

近年来的研究表明，在恶性肿瘤体积发展到可用现代影像学技术检出之前3-5年，患者血中可出现高浓度的肿瘤相关抗原自身抗体。因此，检测血中肿瘤相关抗原自身抗体具有预测肿瘤发病风险和早期诊断肿瘤的重要价值。是肿瘤临床诊断领域的重点发展方向之一。在国外已有诊断肺癌和乳腺癌的早期诊断试剂盒市售。然而，目前所报道的自身抗体检测方法敏感度低，特异性差，假阴性比率可高达50%以上。其主要原因是由于每一种肿瘤相关抗原自身抗体在癌症患者中的阳性检测率平均在10%左右。如何提高诊断试剂敏感度是当前需要亟待解决的关键问题。比较行之有效的方法是寻找新的可充当肿瘤标志物的自身抗体，然后与现有已知的肿瘤相关抗原自身抗体组合成具有敏感度高和特异性强的诊断试剂盒。 

乳腺癌相关基因Annexin A1定位于人染色体9q12～q21.2，由13个外显子和12 个内含子组成，Annexin A1的N端2～12位氨基酸可以和S100C 蛋白相互作用。与其他膜联蛋白（ANX）最主要的结构区别在于其第Ⅲ重复序列与N-端的疏水结构域没有结合钙离子的时候，该螺旋结构由N-端前12 残基构成并代替D-螺旋包埋入第Ⅲ重复序列的核心位点中，而D-螺旋则悬挂于N-端螺旋外。研究表明，Annexin A1参与细胞的生理调节过程，包括炎症反应、细胞增殖分化凋亡、吞噬分泌过程以及细胞死亡信号的调节，并发挥巨大作用，并且与肿瘤的发生发展密切相关。体外实验表明，Annexin A1 C 端结构域通过疏水作用与cPLA2的特异位点结合，从而干扰cPLA2与质膜结合，抑制cPLA2 的活性进而阻遏c-fos等原癌基因的表达。学者们用组织微阵列分析了乳腺正常组织、乳腺癌组织及转移淋巴结组织中AnnexinA1 的表达情况，结果发现：Annexin A1 在乳腺正常组织中表达强阳性，乳腺癌组织中表达下调，而在腋窝淋巴结中表达增强，显示Annexin A1 的表达随乳腺癌的发生发展而变化。最近研究显示：Annexin A1 在乳腺癌高转移、激素敏感细胞系中高表达，干扰此细胞中Annexin A1 的表达后导致细胞迁移和侵袭能力下降。在细胞水平证明了Annexin A1 可促进乳腺癌的侵袭转移。Annexin A1在乳腺肿癌中表达的特异性，提示我们其在乳腺癌早期诊断的应用价值较好，以及作为潜在生物标志物的可能。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是公开一种检测乳腺癌标志物Annexin A1自身抗体的抗原表位序列。 

本发明同时公开了Annexin A1抗原表位的用途。 

本发明提供的一种检测乳腺癌标志物Annexin A1自身抗体的抗原表位氨基酸序列为： 

H-DITSDTSGDFRNALLSEATIIDILTKRNNAQDC -OH

其纯度>95%，pH>7.0。

本发明所述的Annexin A1抗原表位多肽在制备乳腺癌早期诊断试剂盒中的应用。 

本发明利用自行设计的Annexin A1蛋白的线性多肽，采用ELISA法检测乳腺癌患者血清及血浆中Annexin A1蛋白的特异性自身IgG抗体。自身IgG抗体水平升高表明肿瘤患者体内Annexin A1蛋白的表达量增加，预示患者可能出现原发性或继发性乳腺癌，可以预测乳腺癌发生与复发的危险性，指导临床医生对乳腺癌的早期诊断。