[发明专利]一种双功能肽修饰的阿尔茨海默病靶向基因递释复合物及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种双功能肽修饰的阿尔茨海默病靶向基因递释复合物。

背景技术：

中枢神经系统疾病的危害逐年增加，已经成为危害人类健康的最严重的疾病之一。基因药物，由于其分子靶点的高特异性等特点，已成为目前研究较为广泛的大分子药物。但是，由于血脑屏障的限制，基因药物无法自主通过血脑屏障，需要通过脑室或鞘内注射等给药方式，这种侵入性的给药方式给临床给药造成限制。因此，开发具有经血管给药的新型基因药物传递系统，具有很重要的研究价值。

连接特异性配体的聚合物载体可靶向至相应受体高表达的组织和细胞。脑主动靶向研究较广泛的受体有转铁蛋白受体、胰岛素受体、低密度脂蛋白受体、叶酸等。但有研究认为转铁蛋白并不是理想的脑部导向分子，转铁蛋白导向的药物与受体结合存在竞争抑制，受体基本被内源性转铁蛋白饱和，导致导向效率偏低(Qian ZM,Li H,Sun H,et a1.Targeted drug delivery via the transferring receptor-mediated endocytosis pathway[J].Pharmaco Rev,2002,54(4):561-587.)。

RVG29是一种来源于狂犬病毒糖蛋白的29个氨基酸形成的多肽，(Kumar P,Wu H,McBride J L,et al.Transvascular delivery of small interfering RNA to the central nervous system[J].Nature,2007,448(7149):39-43.)相关机制研究表明，RVG可能与BBB上的乙酰胆碱受体和γ-氨基丁酸受体结合后，可实现高效的脑转运。Tet1是由12个氨基酸构成的小肽与神经元细胞GT1B受体具有高度的亲和性(Kwon E J,Lasiene J,Jacobson B E,et a1.Targeted nonviral delivery vehicles to neural progenitor ceils in the mouse subventricular zone[J].Biomaterials,2010,31(8):2417-2424.)。

聚乙二醇聚天冬氨酸(PEG-PBLA)是一种生物可降解、生物相容性较好、毒性较低的高分子材料，结构的特殊性解决了化学修饰的问题。是一种电中性的聚合物，无法与电负性的基因复合，因此经含有氨基的四亚乙基五胺修饰，使高分子材料带正电性，能有效与基因复合。同时，四亚乙基五胺具有一定的缓冲能力，增强内涵体逃逸效果，提高转染效率。端基修饰胆甾醇基能增强基因与高分子载体之间的相互作用，提高复合物的稳定性。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种双功能肽修饰的阿尔茨海默病靶向基因递释复合物，本发明的另一目的在于提供该靶向基因递释复合物的制备方法。

本发明的主要技术方案是，提供一种双功能肽修饰的阿尔茨海默病靶向基因递释复合物，也称递释系统，本发明首先合成了胆甾醇基和四亚乙基五胺修饰的聚乙二醇聚天冬氨酸PEG-P[Asp(TEP)-chole]；然后通过静电吸附作用与基因复合；之后采用RVG29与Tet1等脑靶向功能肽修饰载体材料，制备形成前述的脑靶向给药系统。

本发明是将两种脑功能肽连接，形成双功能肽，与高分子复合物共同靶向于脑。本发明能使载基因给药系统透过血脑屏障并特异性的靶向于神经细胞，提高基因的转染效率，为脑部给药提供一种无创伤给药方式。

本发明的第一方面，是提供一种双功能肽修饰的阿尔茨海默病靶向基因递释复合物(递释系统)，该递释复合物由递释载体和带负电的基因组成：

所述的递释载体，包括PEG(聚乙二醇)化的阳离子聚合物、阳离子聚合物的端基连接RVG29或者Tet1；

所述的带负电的基因与所述的递释载体中的阳离子聚合物通过正负电荷静电吸引。

所述的阳离子聚合物，优选经四亚乙基五胺修饰的聚天冬氨酸。

本发明的一种双功能肽修饰的阿尔茨海默病靶向基因递释复合物的结构如图19所示。

所述的RVG29来源于具有脑转运特性的狂犬病毒糖蛋白，由29个氨基酸构成，末端添加半胱氨酸，其序列为：YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKR ASNGC(SEQ ID NO：1)。