[发明专利]一种猴头菌细胞壁多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食药用真菌提取领域，具体的说是涉及一种猴头菌细胞壁多糖及其制备方法

背景技术

猴头菌(Hericium erinaceus)，在分类学上隶属于菌物界，担子菌门，担子菌纲，猴菇目，猴菇科，猴菇属，又名猴头蘑、熊头菇、刺猬菌，肉嫩味美，营养丰富，是著名的药食两用菌，国内已经广泛用于医治消化不良、胃溃疡、食道癌、胃癌、十二指肠癌、贲门癌等消化系统的疾病。猴头多糖是猴头菌的主要有效成分，研究表明猴头多糖具有抗肿瘤、提高免疫力、降血糖、抗突变、抗衰老等功效。

目前针对猴头菌多糖的研究和利用主要是针对水提胞内多糖，其相关的制备工艺已有很多报道，但对于细胞壁多糖的提取还没有系统全面的报道。值得说明的是，常规水提多糖后的猴头菌子实体残渣量非常可观，含有丰富的细胞壁多糖且它主要是由几丁质和葡聚糖组成，这部分多糖通常没有继续提取利用而被丢弃。真菌细胞壁多糖通常是β构型的葡聚糖，而且多以β-1,3、β-1,6方式连接，这部分葡聚糖具有很强的免疫活性。我们研究也发现猴头菌细胞壁多糖是以β构型的葡聚糖为主要成分，对其开发利用将有利于充分发挥猴头菌多糖的功效作用。

发明内容

本发明提供了一种猴头菌细胞壁多糖的制备方法，该方法包括如下步骤：

①胞内多糖的去除：将猴头菌加入10-20倍重量的水，常温浸泡30-60min，加热至沸腾，保持60-120min，过滤，收集残渣1；

②粉碎水提：将残渣1粉碎，加入10-20倍重量的水，常温浸泡30-60min，沸水提取，离心，分别收集上清液和残渣2；

③碱提：将残渣2，按料液比1:10-1:20(w/v)加入0.1-1M的NaOH溶液，4-10℃浸提2-4h，离心，收集提取液；

④醇沉：对步骤②中收集的上清液和步骤③中收集的提取液进行醇沉，离心收集沉淀，即为猴头菌细胞壁多糖。

其中步骤④中，对步骤②中收集的上清液和步骤③中收集的提取液进行醇沉，可以分别进行，得到的沉淀再合并；也可以先将上清液和提取液合并后再醇沉，最后收集沉淀。

其中步骤②中收集的上清液进行醇沉后，得到的沉淀为水溶性猴头菌细胞壁多糖；对步骤③中收集的提取液进行醇沉后，得到的沉淀为碱溶性猴头菌细胞壁多糖。

本发明还提供了一种由上述方法制备得到的猴头菌细胞壁多糖，其包括水溶性细胞壁多糖和碱溶性细胞壁多糖。

本发明采用残渣粉碎水提和水提后再碱提的方法制备猴头菌细胞壁多糖，得到的细胞壁多糖颜色浅、得率高，达到9.7％，多糖含量在50％以上。该发明能充分提取猴头菌子实体中的细胞壁多糖，提高了猴头菌子实体原料的利用率，且制备的猴头菌细胞壁多糖能够显著刺激巨噬细胞释放NO，从而增强机体的抗肿瘤能力。

具体实施方式

制备猴头菌水溶性细胞壁多糖：

①胞内多糖的去除：将猴头菌子实体加入10-20倍重量的水，常温浸泡30-60min，加热至沸腾，保持60-120min，过滤，残渣重复上述步骤，至滤液通过苯酚-硫酸法检测不到多糖为止，40-60℃烘干残渣；

②粉碎水提：将上述残渣粉碎5-20min(粉碎粒度200-300目)，加入10-20倍重量的水，常温浸泡30-60min，加热至沸腾，保持60-120min，9803g离心15min，残渣重复上述步骤，再提取1-2次，收集上清液和残渣；

③醇沉：上清液浓缩至料液比(w/v)为1:4-1:6，然后添加入无水乙醇，至乙醇终浓度达到60％-80％，4℃静置8-12h，离心收集沉淀，用70％-90％的乙醇洗涤沉淀2-3次；

④干燥：沉淀加水溶解，挥干乙醇后冷冻干燥即获得所需的水溶性胞壁多糖；

制备碱溶性细胞壁多糖：

将上述制备猴头菌水溶性细胞壁多糖步骤②中收集的残渣于40-60℃烘干，按料液比1:10-1:20(w/v)加入0.1-1M的NaOH溶液，4-10℃浸提2-4h，高速离心，残渣重复上述步骤，再提取1-2次，合并提取液；

提取液通过3-6M的HCl调PH7.0，高速离心，浓缩至料液比(w/v)为1:4-1:6，向该浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇终浓度达到60％-80％，4℃静置8-12h，离心收集沉淀，用70％-90％的乙醇洗涤沉淀2-3次；

沉淀加水溶解，挥干乙醇后冷冻干燥即获得所需的碱溶性细胞壁多糖。

合并水溶性细胞壁多糖和碱溶性细胞壁多糖，即得到所需的猴头菌细胞壁多糖。

实施例1：