[发明专利]亚细胞定位的炎症小体活性报告系统及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种融合蛋白及其编码序列和应用。

背景技术

炎症小体(Inflammasomes)介导机体的抗感染免疫，是先天性免疫的重要组成部分，主要通过Caspase-1加工白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素-18前体、产生相应的成熟细胞因子调控炎症反应和细胞死亡(Pyroptosis)。已证实炎症小体参与各种疾病和癌症的发生。目前对炎症小体活性的检测主要依赖于ELISA和Western Blot技术，分别检测成熟型IL-1β和Caspase-1的剪切情况，操作比较繁琐。又由于相应蛋白分子量较小(成熟型IL-1β为17Kda，而Caspase-1的P20亚基为20Kda)，且具有较强的细胞外分泌能力，故往往难以得到稳定的结果。各细胞器与炎症小体的联系已有报道，但炎症小体的亚细胞定位与活化的相互关系尚无报道或研究。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种可以定位于细胞器并且可以评价细胞器与炎症小体活性关系的融合蛋白。

本发明目的之二在于提供上述融合蛋白的编码基因。

本发明目的之三在于提供特定的融合蛋白/基因在制备或构建特定药物激发的炎症小体反应的检测或报告系统中的应用。

本发明构建各种细胞器定位的质粒，通过将IL-1β(pro-IL-1β)与分泌型Gaussia荧光素酶(DN-Gluc)和相应细胞器定位蛋白融合，特异性检测炎症小体激活的Caspase-1对细胞器定位IL-1β前体的加工，通过分析分泌到细胞外的荧光素酶的活性检测细胞器定位的炎症小体活性状态。

本发明提供了分别于细胞质、线粒体、内质网、早期内体、晚期内体、溶酶体、高尔基体和细胞骨架定位的融合蛋白，分别命名为pro-IL-1β-DN-Gluc、Mito-pro-IL-1β-DN-Gluc、ER-pro-IL-1β-DN-Gluc、EE-pro-IL-1β-DN-Gluc、LE-pro-IL-1β-DN-Gluc、LYS-pro-IL-1β-DN-Gluc、GA-pro-IL-1β-DN-Gluc、Actin-pro-IL-1β-DN-Gluc。

作为一种实施方式，上述融合蛋白的编码基因(如图1所示)分别为：

pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.1)

Mito-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.2)

ER-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.3)

EE-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.4)

LE-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.5)

LYS-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.6)

GA-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.7)

Actin-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.8)

本发明同时提供了融合蛋白的氨基酸序列，分别为：

pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.9)

Mito-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.10)

ER-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.11)

EE-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.12)

LE-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.13)

LYS-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.14)

GA-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.15)

Actin-pro-IL-1β-DN-Gluc(SEQ ID No.16)