[发明专利]无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法

权利要求书

1.一种无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

A、在色谱柱中填充抗对流介质；

B、沿纵向填充色谱柱制作pH逐渐变化的缓冲液，使在色谱柱中形成从入口到出口pH值逐渐变化；

C、将样品加到色谱柱入口处，外加与色谱柱内流体流动方向平行的电场，使样品在柱内电聚焦；

D、不断加入pH值继续变化的缓冲液，使得pH梯度随着缓冲液流动逐渐向柱出口迁移；将聚焦在不同pH处的样品洗脱出色谱柱；

E、流出色谱柱的缓冲液进入在线检测及收集器，实现在线收集。

2.如权利要求1所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，步骤A中，所述抗对流介质与样品间无吸附作用或吸附作用微弱。

3.如权利要求2所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，所述抗对流介质为色谱填料；所述色谱填料包括葡聚糖凝胶颗粒或反相色谱填料。

4.如权利要求1所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，步骤B中，所述pH逐渐变化是连续变化或阶段变化；所述pH范围根据被分离样品的等电点范围选取。

5.如权利要求4所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，所述pH逐渐变化的缓冲液是由小分子弱酸和弱碱按照不同配比，制作不同pH值缓冲液，并依次加入色谱柱而形成的。

6.如权利要求5所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，所述小分子弱酸为乙酸；所述小分子弱碱为氨水。

7.如权利要求1所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，步骤C中，外加电场方向由从柱入口到出口的pH变化方向决定；如果柱入口的pH值高于柱出口，则入口处连接高压电源负极，出口处连接高压电源正极；如果柱入口的pH值低于柱出口，则入口处连接高压电源正极，出口处连接高压电源负极。

8.如权利要求1所述的无需两性电解质的分离两性物质的电聚焦方法，其特征在于，步骤D中，如果柱入口的缓冲液pH值高于柱出口，则所述pH值继续变化的缓冲液的pH值等于或高于柱入口的缓冲液pH值；如果柱入口的缓冲液pH值低于柱出口，则所述pH值继续变化的缓冲液的pH值等于或低于柱入口的缓冲液pH值。