[发明专利]一种胡芦巴总皂苷提取物的质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胡芦巴总皂苷提取物中总皂苷的检测方法。

背景技术

胡芦巴为豆科胡芦豆属植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.的干燥成熟种子，原产于地中海东岸、中东、伊朗高原及西马拉雅地区，我国主要分布于四川、安徽、河南、新疆等地，且南北各地均有栽培。胡芦巴在非洲、北美等国家作为调味品和开胃品使用，民间也将其作为滋补品和营养品使用；埃及人将胡芦巴作为生活必需品^[1]。在中国胡芦巴属于药食同源之品，始载于《嘉佑本草》。据《本草纲目》记载:胡芦巴，右肾命门药也，元阳不足，冷气潜伏，不能归元者宜之。张子和《儒门事亲》云，有人病目不睹，思食苦豆，即胡芦巴，频频不缺，不周岁而目中微痛，如虫行入眦，渐明而愈。按此亦因其益命门之功，所谓益火之源，以消阴翳是也。《中国药典》记载本品味苦，性温，归肾经，具有温肾助阳，祛寒止痛之功效^[2]，常用于治疗寒疝，腹胁胀满，寒湿脚气，肾虚腰酸，阳痿。

胡芦巴种子中含有多种化学成分，其中主要为甾体皂苷类、黄酮类、氨基酸类等成分。现代药理研究发现胡芦巴具有降血糖、降血脂、抗糖尿病并发症、抗肿瘤、抗血脂异常、抗氧化损害、解乙醇中毒、杀虫等生物活性^[3]。

研究发现皂苷类成分为胡芦巴药材的主要药效成分。现代药理研究发现胡芦巴总皂苷提取物具有防治糖尿病及糖尿病慢性并发症、调节血糖血脂等作用^[4]。胡芦巴总皂苷可通过下调组织型转谷氨酰胺酶(tTG)实现对大鼠心肌的保护作用^[5]；胡芦巴总皂苷能够降低大鼠酒精性脂肪肝的血清TNF-α水平，升高脂联素(adiponectin)水平，从而促进肝脏脂肪氧化，减少脂质生成，实现对酒精性脂肪肝的治疗作用^[6]；Sreemayee ChatterJee等^[7]研究发现胡芦巴提取物在肿瘤发生的所有阶段均有效，且其能影响小鼠肝脏抗氧化防御系统，调节谷胱甘肽和过氧化脂质体水平；胡芦巴总皂苷对脑缺血具有保护作用^[8]；胡芦巴皂苷还有调节食源性代谢紊乱作用^[9]。

胡芦巴总皂苷作为胡芦巴药材的主要有效成分，市面上销售较大，但存在着不法商贩用廉价皂苷掺假销售现象，而目前主要检测胡芦巴总皂苷的方法是紫外分光光度法，但是此方法误差大、专属性不好，易受环境、仪器等外部因素影响。因此，建立一种较为准确检测胡芦巴总皂苷含量的方法是极其迫切的。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种胡芦巴总皂苷提取物的检测方法。

本发明提供了一种胡芦巴总皂苷提取物的检测方法，它是以薯蓣皂苷元为总皂苷水解产物中的指标成分，采用高效液相色谱法进行检测，其中，色谱条件为：

色谱条件：SSI series 1500高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱柱：TIANHE Kromasil C₁₈(200mm×4.6mm,5μm)，S/N:18201306；流动相：甲醇(B)-水(A)[0-30min:90％B；30-35min:90％B-100％B；35-60min:100％B]；流速：0.8-1.0ml/min；柱温：30-40℃；进样量：10μl；检测波长为：203-210nm。

进一步优选地，所述的检测波长为203nm；所述的柱温是35℃；所述的流速：1.0ml/min。

本发明检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a、对照品溶液的制备：精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，置容量瓶中，加入甲醇充分溶解后，定容至刻度，制备成浓度为1.080mg/ml的对照品溶液，备用；

b、供试品溶液的制备：取胡芦巴总皂苷提取物，加入总皂苷提取物量10-90倍的5％-25％硫酸溶液，超声处理使溶解，于100℃恒温水浴中回流水解1-5小时，期间每隔1h取出一次，超声处理使其分散，然后继续水解，水解完毕后，立即冷却终止反应，过滤，沉淀用水洗至中性，即得水解产物；水解产物用甲醇溶解并定容，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

c、将供试品溶液注入液相色谱仪，测定薯蓣皂苷元的含量。

其中，b步骤加入总皂苷提取物量30-40倍的15％硫酸溶液；所述的水解时间为4小时。