[发明专利]组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备牙源性干细胞的成骨分化制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于牙科制剂领域，涉及一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备牙源性干细胞的成骨分化制剂中的应用。

背景技术

牙周炎是一种常见而且多发的牙周组织慢性感染性疾病，是造成成年人牙齿缺失的主要原因。虽然对牙周病病因的研究在不断深入，但是牙周炎的发病机制仍未完全解决，目前认为菌斑微生物和宿主的免疫炎症反应是主要原因。通过机械清除牙菌斑等牙周基础治疗是目前治疗牙周炎的主要措施，机械治疗可以有效控制牙周炎症，但是单纯应用不能取得明显组织再生疗效。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)是具有自我更新，克隆形成和多向分化潜能的早期未分化细胞。口腔颌面部中存在着大量的间充质干细胞，如牙龈间充质干细胞、牙髓、根尖牙乳头等干细胞，可多向分化，促进成骨。在牙周炎、种植体周围炎等炎症微环境下，牙龈组织和牙周膜中是否存在干细胞，其功能是否发生改变，这些问题都尚不清楚。

表观遗传学(epigenetics)是不涉及DNA序列改变的可遗传的基因表达变化的研究。在其诸多的形式中，以组蛋白的共价修饰占有重要地位,其与基因的表达及调控密切相关联，包括磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化修饰等。其中组蛋白乙酰化及去乙酰化修饰是最重要的方式，是基因表达调控最主要的驱动力，此可逆的动态修饰由组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferases，HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDAC)共同催化，共同控制染色质各区域中核心组蛋白的乙酰化程度。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)具有诱导细胞凋亡、分化和抑制增殖的活性，目前其研究涉及众多肿瘤领域，包括血液系统肿瘤、成神经细胞瘤、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌和结肠癌等，其并对肿瘤细胞具有高选择性和低毒的优点具有非常广阔的应用前景。HDACi通过在转录后修饰组蛋白来调节基因转录和染色质装配，从而成为了某些疾病治疗的新靶点。虽然HDACi介导免疫反应的潜在分子机制有待于进一步探索，但是其强有力的免疫调节活性为治疗炎症免疫性疾病带来了希望。HDACi也被证明能够诱导细胞终末分化，体外研究已经证实多种HDACi能够诱导干细胞或前体细胞骨向或神经向分化。

因此，本研究通过使用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA及LBH589，促进炎症及正常间充质干细胞向成骨分化，利于组织再生，对牙周炎造成的骨组织缺损以及种植体周围炎的骨组织修复有一定作用，利于临床应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备牙源性干细胞的成骨分化制剂中的应用，提供的组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够增强间充质干细胞的成骨分化能力，所述的组蛋白去乙酰化酶抑制剂为曲古抑菌素或帕比司他。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备牙源性干细胞的成骨分化制剂中的应用，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为曲古抑菌素A或帕比司他。

而且，所述牙源性干细胞为牙龈间充质干细胞或根尖牙乳头干细胞。

而且，所述曲古抑菌素A的浓度为100nM。

而且，所述帕比司他的浓度为20nM、50nM或100nM。

一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂促进牙源性干细胞的成骨分化的方法，步骤如下

取第三代的正常和炎症牙龈间充质干细胞，以2×10³/cm²的密度接种于6孔板，待细胞融合达80％后，更换培养基为成骨诱导液，加入TSA使终浓度为100nM,对照组加入等量DMSO，2天换液一次，每天倒置显微镜下观察细胞形态及矿化结节形成情况。

一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂促进牙源性干细胞的成骨分化的方法，步骤如下

将生长状况良好的纯化的第三代根尖牙乳头干细胞以2×10³/cm²的密度接种于6孔板，待细胞融合达80％后，更换培养基为成骨诱导液，加如梯度浓度为为20nM、50nM或100nM的帕比司他，2天换液一次，每天倒置显微镜下观察细胞形态及矿化结节形成情况。

一种制备促进牙源性干细胞成分分化TSA壳聚糖缓释药物的方法，包括如下步骤：

⑴壳聚糖温敏体系的制备:称取2g壳聚糖粉末溶解在100mL浓度1％醋酸溶液中，配制成2％壳聚糖溶液，移取一定体积的2％壳聚糖溶液于试管中，按比例逐滴加入58％β-甘油磷酸钠溶液，振荡混匀后，以少量NaOH稀溶液调节混合液的pH＝5；