[发明专利]黄蝉素在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及黄蝉素在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

黄蝉素(Allamcin)，分子式C₁₃H₁₄O₅，分子量250.25，分子结构为：

黄蝉素具有细胞毒活性，对纤维肉瘤(fibrosarcoma)、黑色素瘤、乳癌、肺癌、结肠癌、KB细胞、P388的ED₅₀(μg/mL)依次为3.1、0.9、0.1、1.2、0.3、0.3和0.2。

黄蝉素来源于夹竹桃科(Apocynaceae)黄蝉Allamanda neriifolia Hook.的叶，黄蝉叶主要成分为黄蝉素和黄蝉花辛。

通过文献检索，国内尚未见黄蝉素用于制备抗肿瘤药物。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，应用黄蝉素制备抗肿瘤药物。

本发明的技术方案如下：

本发明所述的黄蝉素，其制备方法包括以下步骤：

(1)以黄蝉叶为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用；

(2)原料按照料液比1∶4-6(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3-0.5％的纤维素酶，在超声功率500-700W、45-60℃条件下酶解60-90min，得到酶解原料；

(3)将酶解原料投入加入闪式提取器中，加入提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；

(4)将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集黄蝉素流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；

(5)将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到黄蝉素结晶。

所述步骤(2)中乙醇水溶液体积百分比为70-80％。

所述步骤(2)中提取溶剂为70-85％的乙醇溶液。

所述步骤(3)中闪式提取电压为150V，提取时间为3-5min。

所述步骤(4)中高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1∶10。

所述步骤(4)中氯仿-甲醇的体积比为1∶1-1∶13。

黄蝉素在制备抗肿瘤药物中的应用。

通过体外肿瘤细胞体外抑制试验，观察黄蝉素的抗肿瘤作用，结果表明黄蝉素对A-549肺癌和HCT-8结肠癌均有一定的抑制作用，具有显著抗癌活性，且其毒副作用小。

本发明的有益效果通过以下实验得到了验证：

实验方法：

1、受试提取物：黄蝉素提取物

(1)性状：结晶，味苦。

(2)规格：含黄蝉素≥90％。

(3)溶剂：乙醇或甲醇。

(4)储存条件：4℃，密封保存。

2、细胞株：肺癌细胞株A-549、结肠癌细胞株HCT-8。

3、给药剂量和方法

黄蝉素组：10mg/kg/天，灌胃给药，隔一天一次，共五天。

阴性对照组：10mg/kg/天，生理盐水肌注给药，隔一天一次，共五天。

阳性对照组：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注给药，隔一天一次，共五天。

灌胃后2h，用HPLC检测血浆药物浓度。

4、种植瘤模型的建立与给药

(1)皮下种植：分别将上述细胞培养至90％融合，收集细胞，取2×10⁶细胞悬液，注射至小鼠肋下皮下组织，于术后15天取材，称量瘤重。另取同样模型，观察30天，计算药物对模型动物存活率的影响。

(2)肺内种植瘤肺转移模型：取2×10⁶细胞悬液注射至小鼠肺包膜内，于术后15天取肺，测量瘤重和肺转移数。

(3)给药方式：种植瘤细胞同时给药。

5、结果

结果如表1、表2和表3显示，黄蝉素组用药均有不同程度的抑制肿瘤生长和转移的作用，可延长实验小鼠的生存期。

表1黄蝉素对种植瘤的抑制作用

表2黄蝉素对肿瘤转移发生率的影响(n＝20，％)

表3黄蝉素对实验小鼠生存率的影响(n＝20，％)