[发明专利]一种用于β-HCG检测的时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于β-HCG检测的时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒，其特征是：所述分析法包括下列步骤：

①固相抗体制备：将抗β人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）单克隆抗体用碳酸钠缓冲溶液稀释至1-10ug/mL

作为包被液，包被反应板，并用封闭液封闭；

②镧系元素离子标记抗体制备：选用配对抗β-HCG单克隆抗体用镧系元素离子标记；

③在步骤①制得的具有固相抗体的反应板上，每孔加入β-HCG标准品或待测样品，以及用反应缓冲液稀释的标记抗体进行孵育，最后进行荧光测定。

2.根据权利要求1所述β-HCG时间分辨免疫荧光分析法，其特征是步骤②中的镧系元素离子为Eu³⁺。

3.根据权利要求1所述β-HCG时间分辨免疫荧光分析法，其特征是步骤③中的反应缓冲液为PH 7.8的50mmol/L Tris-HCl，内含0.9％NaCl，1％BSA，0.05％牛IgG，200uM DTPA，0.05％Tween20和0.1％NaN3；且该步骤③在时间分辨荧光免疫分析仪器上自动完成。

4.如权利要求1所述的β-HCG时间分辨免疫荧光分析法，其特征是步骤②中镧系元素离子标记抗体制备是采用如下方法进行：

(1)取待标记抗体加入透析袋中，放入配制好的PH 9.5的碳酸盐缓冲液中，室温透析过夜，其间多次换透析液；

(2)次日，取出抗体，稀释至0.2-5 ug/mL，DTTA-Eu：抗体按质量比为2∶1的比例边振荡边加入DTTA-Eu，室温下在振荡过夜，然后在黑暗中静置48小时；

(3)标记好的抗体与游离DTTA-Eu通过1×30cm的Sephadex G50色谱柱分离，分离过程用核酸蛋白仪监控；分离所用洗脱液为pH7.8 50mmol/L Tris-HCl缓冲液；

(4)用小试管依次分段接受流出物，用分光光度计，在280nm处测吸光度，同时测荧光强度，计算出Eu++标抗体浓度；

(5)用0.22um的滤器过滤；

(6)加入0.5％ BSA，2-8℃保存。

5.一种β-HCG定量检测试剂盒，其特征是试剂盒包括：包被抗体的缓冲液、封闭液、反应缓冲液、洗液、增强液，以及作为包被抗体的抗β-HCG单克隆抗体，镧系元素离子标记的抗β-HCG单克隆抗体和β-HCG标准品。

6.根据权利要求5所述的一种β-HCG定量检测试剂盒，其特征是标准品为用含6％BSA，4％蔗糖，0.1％NaN3，50mmol/L Tris-HCl缓冲液将β-HCG蛋白配制成标准品。