[发明专利]一种氯胺酮快速检测卡及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于缉毒检测领域，具体地说是涉及一种利用荧光微球免疫层析技术定性检测氯胺酮的检测卡及其制备方法。

背景技术

氯胺酮俗称“K粉”，是苯环己哌啶的衍生物，属N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗物，是一种非巴比妥类麻醉剂。近年来，随着兴奋剂、γ-羟基丁酸和大麻等与特殊的“社交”和“性环境”相关的“舞会药”在欧美国家的流行，K粉滥用的问题日益严重，本世纪初在我国开始出现K粉的滥用问题，且有越演越烈之势。

目前，针对上述毒品的检测和监控方法包括确证法和筛查法两大类。确证法主要包括高效液相色谱、气相色谱、逆流色谱、离子色谱、离子阱质谱、等离子质谱、液质或气质联用等利用高端设备为辅助手段的方法。以上方法虽然敏感、特异、稳定，但是存在检测时间长，一般条件下检测通量不高，需要昂贵的设备支撑，因此确证法大多用于有疑问事件的仲裁；筛查方法一般是指快速检测方法。ELISA(酶联免疫吸附测定)以及胶体金免疫层析法是目前国际公认的主流技术，这两种方法具有检测速度快，价格便宜，操作简单等优点，是目前国内外检测毒品的主要监控方法。但ELISA检测仍需专业人员，且需要较长的时间显示结果；胶体金法一般情况下对氯胺酮能进行定性分析，检测时间比较短(10-15min)。然而，胶体金法由于其灵敏性限制，不能将样品进行多倍稀释，以至于样品中的干扰成分比较多，导致实际样品检测过程中会产生假阴性或假阳性现象。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能检测氯胺酮的检测器具，直接应用免疫学的方法检测样品中氯胺酮的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的高灵敏度的检测方法。

本发明的技术方案：一种氯胺酮快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳中设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔；测试条是由支承背板上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫、荧光素颗粒膜、硝酸纤维素膜、和吸水膜所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端叠置粘贴吸水膜，另一端叠置粘贴样品垫，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段荧光素颗粒膜；荧光素颗粒膜为含抗氯胺酮抗体的荧光素颗粒和荧光素颗粒标记的抗肌动蛋白抗体包被的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含氯胺酮蛋白质偶联物的检测带，含肌动蛋白质控带，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

荧光素颗粒选自荧光物质为菲咯啉联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯或量子点。

含抗氯胺酮抗体的荧光素颗粒的制备方法为：

取荧光微球在1000×g离心20 min，离心后收集沉淀，用0.01M pH 5.6 的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为OD450＝0.2，然后分别加入20～100mg/ml对乙基-N，N-二甲基丙基碳二亚胺100μl，2～20mg/ml氮羟基琥珀酰亚胺100μl，再加入0.01M pH 5.6的硼酸盐缓冲液，振荡混匀，室温孵育30min后，1000×g离心5～15min，沉淀用0.01M pH 7～8的硼酸盐缓冲液重悬，并调节微球浓度为OD450在0.2～1.0，在0.1ml的该荧光微球中加入1～10μg抗氯胺酮抗体，充分混匀后，室温搅拌反应2 h，超纯水离心洗涤2～5次，用0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液复溶沉淀至起始体积备用。

依据同样的方法制备含抗肌动蛋白抗体的荧光素颗粒。将含抗氯胺酮抗体的荧光素颗粒和含抗肌动蛋白抗体的荧光素颗粒以合适的比例混合，用BIODOT操作平台喷涂至玻璃纤维膜上，真空冷冻干燥1～2h，置于干燥环境中备用。

在样品吸收垫上滴加样品，如果样品中有氯胺酮物质，则氯胺酮经层析作用移动到荧光素颗粒膜的时候就会和荧光素标记的抗氯胺酮抗体结合形成复合物，并带动荧光素标记的质控抗体一起在层析作用下上行。当移动到检测带时，未被样品中氯胺酮结合的游离的荧光素标记的抗氯胺酮抗体就会和检测带上的偶联在载体蛋白上的氯胺酮结合，而有荧光信号。荧光素标记的质控抗体则被质控带上的质控抗原捕获，而有荧光信号。而样品中氯胺酮和荧光素标记的抗氯胺酮抗体形成的复合物则被层析到吸水纸上。样品中的氯胺酮越多，则检测带中剩余游离的荧光素标记的抗氯胺酮抗体越少，结合到检测带上的荧光素标记的抗氯胺酮抗体越少，荧光信号也就越弱，依此来检测样品中的氯胺酮的含量。