[发明专利]一种潮汐式生物反应器及其培养百合籽球的方法

权利要求书

1.一种潮汐式生物反应器，其特征在于包括营养液储存容器、培养容器、抽气泵、定时器、空气过滤膜、节水阀和加液过滤器，营养液储存容器与培养容器通过安装有节水阀的导管相连，所述的营养液储存容器和培养容器各自分别通过安装有空气过滤膜的导管与对应的抽气泵相连，所述的抽气泵与定时器相连，所述的培养容器中设有与底面平行的金属纱网，所述的在营养液储存容器与抽气泵之间的导管上设有加液过滤器。

2.基于权利要求1所述的潮汐式生物反应器培养百合籽球的方法，其特征在于包括如下步骤：

A. 将百合籽球中层及内层鳞片作为外植体接入培养基中，1L的培养基含有如下组分：

MS培养基              4.4g          

萘乙酸                 0.0～0.1mg/L

6-苄基腺嘌呤            1.0～1.5mg/L

蔗糖                   30～60g/L

琼脂糖                  6g/L

去离子水                 余量

pH                     5.8～6.0；

将MS培养基、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、蔗糖和琼脂糖溶于去离子水中，搅拌至混合均匀，并调节pH为5.8～6.0即得培养基；

在光照强度为2000～2500lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，进行小籽球诱导和增殖培养，直至外植体萌发分化出0.2～0.4cm的小籽球，切下得百合小籽球；

B．在无菌环境下将下列籽球膨大培养基灌入营养液储存容器中：1L的籽球膨大培养基含有如下组分：

MS培养基               4.4g          

萘乙酸                  0.1～0.2mg/L

6-苄基腺嘌呤             0.5～1.0mg/L

蔗糖                    45～60g/L

去离子水                 余量

pH                     5.8～6.0；

将MS培养基、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤和蔗糖溶于去离子水中，搅拌至混合均匀，并调节pH为5.8～6.0即得籽球膨大培养基；

C. 将A步骤培养得到的百合小籽球作为外植体，在无菌环境下置于培养容器中的金属纱网上；

D．设置潮汐培养程序：每两小时浸没百合小籽球30分钟，每天12个循环，控制温度为25±2℃；每天在光照强度为2000～2500 lx的条件下进行16小时光照培养，然后再黑暗培养8小时；潮汐培养30天，每10～15天更换一次培养基，得到潮汐培养小籽球；

E.将D步骤得到的潮汐培养小籽球在无菌环境下取出，人工去叶后再次放入培养容器中，以下列生根培养基替换籽球膨大培养基继续潮汐培养，每一小时浸没10分钟，每10天更换一次培养基，黑暗环境下连续培养20天，出瓶，得到出瓶后的百合籽球；

所述的1L的生根培养基含有如下组分：

MS培养基               4.4g          

萘乙酸                0.00～0.05mg/L

蔗糖                    45～60g/L

去离子水                 余量

pH                     5.8～6.0；

将MS培养基、萘乙酸和蔗糖溶于去离子水中，搅拌至混合均匀，并调节pH为5.8～6.0即得生根培养基；

F.将E步骤得到的出瓶后的百合籽球放入质量浓度为0.1～0.2%的多菌灵溶液中消毒1～2min后，用百合基质包装，在-1℃冷库春化85～90天后，下地移栽，然后按常规进行浇水、施肥管理，即得到百合籽球。

3.根据权利要求2所述的潮汐式生物反应器培养百合籽球的方法，其特征在于A步骤中诱导和增殖培养时间为2.5～3.0个月。

4.根据权利要求2所述的潮汐式生物反应器培养百合籽球的方法，其特征在于A步骤所得小籽球是在超净工作台中切下的。