[发明专利]利用茉莉酸甲酯诱导铁皮石斛生产石斛多糖的方法

说明书

技术领域

本发明提供一种利用茉莉酸甲酯诱导铁皮石斛生产石斛多糖的方法，属于生物技术领域。

背景技术

石斛多糖具有多种药理功效，主要体现在调节机体免疫力、抗肿瘤、抗氧化、降血糖和抗白内障等方面。但由于铁皮石斛在自然条件下繁殖率低、生长缓慢、且被过度采挖利用。此外，由于生态环境的破坏，导致野生资源濒临灭绝。这都限制了石斛多糖生产和进一步开发利用。石斛组织培养物在多糖含量、多糖的单糖化学组成及作用等方面与天然野生品存在着极大的相似性，以组织培养物替代原药材或者生产有效成分成为解决石斛资源短缺的方法之一，但依然无法解决石斛多糖药源紧缺的问题。

目前，国内市场上已经有一些提高铁皮石斛多糖产量的相关技术，如浙江农林大学的“一种提高铁皮石斛多糖含量的栽培方法”(CN201210096652.0)，在红光或红光和蓝光的混光条件下栽培铁皮石斛，来提高铁皮石斛的多糖含量。浙江农林大学的“一种提高铁皮石斛多糖的方法”(CN201110044537.4)，通过改善栽培条件以及声波刺激以达到提高铁皮石斛多糖的目的。关于铁皮石斛积累多糖的诱导因子，上述相关技术都集中在物理因子调节方面，并且需要光、声发生器等设施，技术工艺比较复杂，这无疑增加了生产成本和技术推广的难度。

发明内容

本发明的目的是提供一种技术工艺简单易行、廉价高效且能显著提高铁皮石斛生产石斛多糖效率的利用茉莉酸甲酯诱导铁皮石斛快速生产石斛多糖的方法。其技术方案为：

一种利用茉莉酸甲酯诱导铁皮石斛生产石斛多糖的方法，其特征在于采用如下步骤：

(1)制备铁皮石斛组培苗：铁皮石斛种子播撒于1/2MS培养基表面，在温度23～25℃，光照强度1500～1700lx，光暗比为10h/14h条件下培养至苗高3～4cm，获得诱导培养的铁皮石斛组培苗；

(2)积累石斛多糖：用2％的无水乙醇溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成浓度为10mmol/L的茉莉酸甲酯母液，将茉莉酸甲酯母液添加到培养基中至茉莉酸甲酯终浓度为195～205μmol/L；然后将铁皮石斛组培苗转苗到上述添加了茉莉酸甲酯母液的培养基中，在26～28℃、相对湿度66～68％、光强1800～2000lx、光暗比为12h/12h条件下培养29～31天。

所述利用茉莉酸甲酯诱导铁皮石斛生产石斛多糖的方法，其特征在于：步骤(1)中，采用添加30g/L蔗糖的1/2MS培养基，石斛种子采用浙江雁荡山铁皮石斛种子。

本发明与现有技术相比，其优点是：在组织培养中施加了少量的茉莉酸甲酯，大幅提高了铁皮石斛中石斛多糖的积累效率，具有投资少、效果显著、方便易行的特点，对于降低石斛多糖的生产成本、满足石斛多糖的大规模生产具有重要意义。

具体实施方式

实施例1：

步骤1、制备铁皮石斛组培苗：采用浙江雁荡山铁皮石斛种子，播撒于添加30g/L蔗糖的1/2MS培养基表面，在温度23℃，光照强度1500lx，光暗比为10h/14h条件下让种胚分化成芽。日光灯下培养至铁皮石斛无菌苗高度约3～4cm，即获得诱导培养的铁皮石斛无菌苗。

步骤2、诱导铁皮石斛积累石斛多糖：茉莉酸甲酯采用美国西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司生产的茉莉酸甲酯。先用2％的无水乙醇溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成浓度为10mmol/L的茉莉酸甲酯母液，将茉莉酸甲酯母液添加到含30g/L蔗糖的1/2MS培养基中，至茉莉酸甲酯终浓度为195μmol/L，然后将石斛组培苗转苗到上述添加了茉莉酸甲酯母液的1/2MS培养基，与空白对照组同时在26℃、相对湿度66％、光强1800lx、光暗比为12h/12h条件下培养31天。

实施例2：

步骤1、制备铁皮石斛组培苗：采用浙江雁荡山铁皮石斛种子，播撒于添加30g/L蔗糖的1/2MS培养基表面，在温度24℃，光照强度1600lx，光暗比为10h/14h条件下让种胚分化成芽。日光灯下培养至铁皮石斛无菌苗高度约3～4cm，即获得诱导培养的铁皮石斛无菌苗。