[发明专利]降解有机磷农药工程菌、其构建方法及应用

权利要求书

1.一株降解有机磷农药工程菌，其特征在于，它为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）sp.LTG1，该菌株已于2014年6月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No. 9272。

2.权利要求1所述的降解有机磷农药工程菌的构建方法，其特征在于：通过聚合酶链式反应从黄杆菌(Flavorbacterium. sp )ATCC27551中提取有机磷农药水解酶OPH编码基因opd，再将编码基因opd插入至载体pHT43，构建表达载体pHT43-opd，再将pHT43-opd转入枯草芽孢杆菌WB800中。

3.根据权利要求2所述的降解有机磷农药工程菌的构建方法，其特征在于，编码基因opd插入至载体pHT43的步骤是：构建重组表达质粒载体pTG19-T-opd，再对载体 pTG19-T-opd和表达载体pHT43分别用BamHI、SmaI酶双酶切，再将pTG19-T-opd切下的opd基因克隆到载体pHT43上。

4.根据权利要求2所述的降解有机磷农药工程菌的构建方法，其特征在于，pHT43-opd转入枯草芽孢杆菌WB800中的步骤是：先将pHT43-opd载体克隆到大肠杆菌DH5α中，挑取阳性克隆，提取质粒，然后再通过电击转化法把pHT43-opd转入枯草芽孢杆菌WB800中。

5.根据权利要求2所述的降解有机磷农药工程菌的构建方法，其特征在于：所述的聚合酶链式反应中使用的上、下游引物的序列分别如SEQ ID NO.2～3所示。

6.根据权利要求4所述的降解有机磷农药工程菌的构建方法，其特征在于：所述的电击转化法中，电转培养基为：0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖，其余为水；电转仪设置为2.1kv，5ms，电击1次。

7.权利要求1所述的降解有机磷农药工程菌在有机磷类农药降解中的应用。

8.根据权利要求7所述的降解有机磷农药工程菌在有机磷类农药降解中的应用，其特征在于：所述的有机磷类农药选自敌敌畏、马拉硫磷、乐果、氧化乐果、对硫磷、甲基对硫磷或乙酰甲胺磷。

9.权利要求1所述的降解有机磷农药工程菌在制备用于有机磷类农药降解的菌剂中的应用。