[发明专利]一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括其的人胰岛素检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断医学检验领域。具体地说，本发明涉及一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括其的人胰岛素检测试剂盒。

背景技术

胰岛素是51个氨基酸组成的蛋白激素，它由两条肽链，即，A链(含有21个氨基酸)和B链(含有30个氨基酸)通过二硫键连接组成，相对分子量为5808。胰岛素在分子构象上分为三大区域：分子内核，分子表面疏水区和分子表面极性区。分子内核都是由疏水残疾构成，包括大部分支链氨基酸残基和A6、A11、A20、B19四个半胱氨酸残基。

胰岛素分泌后主要有两种用途。一部分是为了维持机体空腹血糖正常而存在的胰岛素，称作基础胰岛素；另一部分是为了降低餐后血糖升高，以及维持餐后血糖正常而存在的胰岛素，称作餐时胰岛素。餐时胰岛素的分泌其作用是抑制肝脏内源性葡萄糖的产生。机体在这种机制下受到保护，血糖在其他时候被控制在空腹状态水平左右，而餐后的血糖被控制在7.0mmol/L以下。

胰岛素的检测在临床中主要应用于：I型糖尿病和II型糖尿病的诊断、II型糖尿病患者口服糖尿病药物的选择、低血糖综合症诊断及胰岛素自身免疫综合征、胰岛素结构异常、胰岛素受体异常、NIDDM(Non-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus,NIDDM)合并高血压、胰腺炎、多囊卵巢综合征等疾病的诊断。

目前临床上胰岛素的检测方法主要有放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)等。RIA方法由于试剂具有放射性，对操作者具有一定危害性，且操作复杂，试剂有效期短等缺点，早已不推荐作为胰岛素临床诊断；ELISA法的缺点在于无法准确进行定量，且批间差异较大，线性范围有限，无法持续监控患者胰岛素水平；TRFIA虽然测值较为准确，但依然存在反应时间较长，对环境要求较高，容易受空气尘埃影响，且多为96人份/盒，使用稀土标记物等缺点也使得此免疫方法无法大规模使用；CLIA法是一种较为先进的免疫学方法，具有反应时间短、灵敏度高、特异性好、线性范围宽、重复性好等优点，标记物稳定性好，在保证检测速度的前提下，也能达到检测高通量。根据目前胰岛素临床的应用情况，市场应用前景最好且诊断最可靠的方法学为CLIA法。

虽然目前中国市场上已有注册批准的胰岛素化学发光免疫分析法测定试剂盒，但多为进口试剂，成本较高，且试剂盒的制备方法和相关材料均作为保密资料，未被公开，不利于胰岛素检测在社区基层医院的推广。国产胰岛素试剂盒重复性较差，批间差异难控，且灵敏度较低，交叉反应率较高，临床应用前景较差。

因此，本领域急需一种具有检测灵敏度高、特异性好、重复性高等优点的人胰岛素检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法，利用所述人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒检测人胰岛素的灵敏度大幅提高。

本发明还有一目的是提供包括上述人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的人胰岛素检测试剂盒。

本发明再有一目的是提供利用本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒或人胰岛素检测试剂盒检测人胰岛素的方法。

在第一方面，本发明提供一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，所述人胰岛素单克隆抗体在与磁微粒交联之前，利用非离子表面活性剂进行前处理。

在优选的实施方式中，所述非离子表面活性剂是LF221(BASF公司)、或F68(Sigma公司)、或二者的组合。

在优选的实施方式中，所述非离子表面活性剂是LF221(BASF公司)和F68(Sigma公司)的组合。

在优选的实施方式中，所述人胰岛素单克隆抗体是罗氏公司的单克隆抗体(Roche，克隆号为BM1)。

在另一优选的实施方式中，所述前处理是将非离子表面活性剂与人胰岛素单克隆抗体进行温育；优选地，在2-8℃，温育30分钟。

在另一优选的实施方式中，进行前处理时，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂LF221溶液和F68溶液的浓度分别为1-3mg/ml、0.8-1.2wt％、0.8-1.2wt％，优选2mg/ml、1.0wt％、1.0wt％。

在另一优选的实施方式中，进行前处理时，人胰岛素抗体溶液与LF221溶液或F68溶液的体积比为(8-10):(0.8-1.2)；优选9:1的比例混合。