[发明专利]一种信号放大技术电化学传感器检测DNA的方法

权利要求书

1.一种信号放大技术电化学传感器检测DNA的方法，包括以下步骤： 

(1)电化学探针制备方法其特征在于： 

(a)取2mL的离心管，加入2～30μL DNA1和2～30μL pH8.2的50mM的Tris-HCl缓冲溶液和10μL TCEP反应1h，用以活化巯基；然后，另取2mL离心管依次加入1mL金-铂纳米粒子和100～2000μL硫堇溶液反应0.5h，使硫堇吸附在金-铂纳米粒子上； 

(b)将吸附了硫堇的金-铂纳米粒子加入到活化好的巯基DNA1中，放入摇床轻摇反应16h，使巯基DNA1与金-铂纳米粒子连接起来；最后在15000转速下，离心30min，得到红色沉淀，并用10mM，pH8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次，分散在1mL10mM的pH8.0的磷酸缓冲溶液中得到DNA1/Th/Au@PtNPs电化学探针； 

(2)金电极的预处理：金电极经0.2μm，0.03μm，0.05μm的α-A1₂O₃抛光粉抛光后，用二次蒸馏水冲洗干净，并在超声波水浴中超声5min，用高纯氮气吹干备用； 

(3)金纳米粒子修饰金电极制备：首先取2～30μL AuNPs溶液滴涂在金电极表面，得金纳米粒子修饰金电极(AuNPs/GE)，置于避光处自然晾干； 

(4)发卡DNA的预处理：取一定量的1.0×10^-4M～1.0×10^-7M的巯基DNA4(或DNA3)于2mL离心管中，置于95℃恒温水浴槽中加热5min，取出后立即置于冰水中冷却1min即得到发卡DNA； 

(5)电化学传感器的制备：取2～30μL上述预处理后的发卡DNA3滴涂在AuNPs/GE表面，4℃自组装24h；接着取10μL10^-4M的巯基乙醇滴于电极表面，反应30min，然后用10mM的磷酸缓冲溶液冲洗两次，即得电化学传感器； 

(6)标准曲线的绘制：取一组浓度梯度的目标DNA2，分别滴加到电化学传感器上，37℃下孵育2h后，取10μL发卡DNA4滴加到电极表面，37℃下孵育4h，然后用10mM，pH8.0的磷酸缓冲溶液冲洗两次；最后，取10μL制备的电化学探针滴加到电极表面，继续孵育1h；然后利用循环伏安法或DPV测得电流强度，根据目标物浓度与电流强度的关系作图得标准曲线，并根据标准曲线计算线性回归方程； 

(7)样品测定：将含目标DNA2的样品滴加到电化学传感器上，37℃下孵育2h后，取10μL发卡DNA4滴加到电极表面，37℃下孵育4h，然后用10mM，pH8.0的磷酸缓冲溶液冲洗两次；最后，取10μL制备的电化学探针滴加到电极表面，继续孵育1h；然后利用循环伏安法或DPV测得电流强度，根据电流强度，再利用线性回归方程计算样品中目标DNA2含量。 

2.根据权利要求1的测定目标DNA的方法，其特征在于所述的DNA序列如下： 

所述的DNA1的部分序列为：5`-TTT TTT ATT CGA TCC GGT GCT CTT ATGCCC-HS-3`； 

所述的DNA2的部分序列为：5’-CAA TAA CTA CCG GGC ATT ACT GGC CTT-3’； 

所述的DNA3的部分序列为：5’-SH-C₆-AAA GCC AGT AAT GCC CGG TAG TTA TTCCAT CGT GTA CAA TA A CTA CCG GGC ATA AGA GCA CCC TTG TAC-3’； 

所述的DNA4的部分序列为：5’-TAG TTA TTG TAC ACG ATG GAA TAA CTA CCG GGCATC CAT CGT GTA C-3’； 

3.根据权利要求1所述的电化学传感器在检测DNA含量中的应用。