[发明专利]一种稀少精子体外培养液

说明书

技术领域

本发明涉及一种稀少精子体外培养基，具体地说，是一种用于特殊精子的体外处理、培养，以提高精子运动能力的体外培养基。

背景技术

目前全世界约有20％育龄夫妇患有不孕症，不孕症中男性原因占50％左右，而在男性不育症中约60％以上，原因为少、弱精子症，甚至为无精子症。自1992年卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术问世以来，使精液中无精子的患者可利用睾丸、附睾中获取的精子去生育一个自己的孩子。但是睾丸精子不具有运动能力或仅有微弱的震颤运动力，显微镜下直接观察睾丸穿刺物中的精子时无法确定其死活。尽管通过体外培养可以使部分睾丸精子产生活动力，但活动力较弱，很少出现前向运动精子，仍有多数精子并未出现活动力。

随着辅助生殖技术在男性不育治疗中的应用，促进了通过体外培养来提高精子运动和受精能力的研究。目前有许多人尝试着将许多物质：像血清、腹腔液、卵泡液和其他的化学修饰药物如孕酮、腺苷类似物和甲基黄嘌呤等用来提高人精子的运动和受精能力。但是市面上尚没有一种专门针对少、弱精子，睾丸精子的体外培养的专门培养液。

中国专利文献CN103805559A公开了一种用于精液样品洗涤或精子培养保存的精子洗涤培养液，其特征是含有一定浓度的神经营养因子(NGF)，能够明显提高精液样品中的精子活力和存活率。中国专利文献CN103352025A公开了改善人精子运动能力的体外培养液及其应用，该培养液含有果糖6-磷酸(F6P)，该发明改善人精子运动能力的体外培养液，对离体后纯化的人精子进行培养，除了维持精子运动还能显著提高了正常人精子的活力，为改进辅助生育技术提供了有意义的参考。但是关于一种用于特殊精子的体外处理、培养，以提高精子运动能力的体外培养基目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对市面上辅助生殖技术使用的各种培养液中没有一种专门针对少、弱精子，睾丸精子的体外培养的专用培养液而研发，提供一种稀少精子体外培养基。

本发明的再一目的是，提供一种稀少精子体外培养基的应用。

本发明的另一目的是，提供一种体外处理稀少精子的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种稀少精子体外培养基，每升所述的培养基中含有以下组分：氯化钠98.0 mmol、氯化钾4.5 mmol、硫酸镁0.20 mmol、磷酸钾0.35 mmol、乳酸钙21.4 mmol、碳酸氢钠20.0 mmol、葡萄糖2.90 mmol、丙酮酸钠0.33 mmol、谷氨酰胺1.0 mmol、牛磺酸0.1 mmol、己酮可可碱2.0 mmol、L-天冬酰酸0.1 mmol、L-天冬氨酸0.1 mmol、甘氨酸1.0 mmol、L-脯氨酸0.1 mmol、L-丝氨酸0.1 mmol、依地酸 100umol、庆大霉素1.0 mmol、0.5%酚红1 ml。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的培养基在稀少精子体外处理和培养中的应用。

所述的稀少精子为临床严重少、弱精子症、睾丸及附睾获取的精子。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：一种体外处理稀少精子的方法，包括以下步骤：将获取的精子置Modified-HTF 1.5ml液中处理，离心后去上清后，添加权利要求1所述的稀少精子体外培养基1ml，再置5% CO₂箱中培养30分钟至3小时。

本发明优点在于：

1、本发明通过综合各种化学物质组合的培养基，将它用于培养精液中无活动能力的少、弱活精子，能明显刺激那些原本精液中微弱摆动，不前向运动的精子产生活动，并且对精子生存能力无明显的影响；

2、本发明的稀少精子体外培养基与以往传统洗精液不同，特别适用于临床严重少、弱精子症、睾丸及附睾获取的精子样本体外处理和培养，以提高少、弱精子和睾丸精子的运动能力，使单精子卵胞浆内显微注射（ICSI）操作时寻找有运动能力的精子变得容易而安全。

附图说明

图1. 稀少精子处理流程。

图2. 稀少精子体外培养基使用前后运动精子数比较。

图3. 稀少精子体外培养基使用前后前向运动精子数比较。

图4. （Fitc-psa 荧光染色） 稀少精子顶体完整率的检测。

图5. （Fitc-psa 荧光染色）正常精子顶体完整率的检测。

图6. （Fitc-psa 荧光染色）精卵结合后，顶体发生反应的精子。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。