[发明专利]进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3，属于蛋白质领域。

背景技术

细菌免疫球蛋白结合蛋白(immunoglobulin(Ig)-bindingproteins，IBPs)是一类由细菌产生的特异结合宿主抗体的细菌免疫球蛋白结合蛋白，是细菌重要致病因子之一。研究最多的IBPs有金黄色葡萄球菌蛋白A(StaphylococcalproteinA，SpA)、链球菌(C和G群)蛋白G(StreptococcalproteinG，SpG)和部分大消化链球菌表面的蛋白L(PeptostreptococcusmagnusproteinL，PpL)。研究表明，细菌IBPs均包含由多个的序列高度同源的结合结构域头尾相连重复组成的抗体结合区，每个单结构域具有与全分子完全相同的结合特性，形成Ig结合功能的基本单位。

SpA含有五个高度同源的重复结构域，自N端起分别为E、D、A、B、C，单个结构域约58个氨基酸残基大小，形成3股反向平行排列α-螺旋的空间结构，每个单结构域具有独立的与哺乳动物IgG抗体重链中的第二及第三恒定区(CH2γ,CH3γ)间的分界面结合活性，该结合以螺旋1和螺旋2与Fc的疏水作用为主并通过两个分子之间的四对氢键得到进一步稳定。ProteinA还可以结合由人VHⅢ基因家族编码的Fab片段，因此还能结合其它类型抗体。SpG分子量为65KD，包含3个高度同源的Ig结合结构域B1、B2和B3(为区别于SpA中的B，以下统称G1、G2、G3)，与SpA不同，其单结构域由四个串联的β折叠和一个α螺旋组成，也结合于IgGFc的CH2γ和CH3γ间的分界面上，与SpA的结合部位部分重叠。因其折叠结构含量很高，SpG结合Fc位点位于其螺旋和连结螺旋至β－折叠3的环区中。此外，SpG可以结合IgG的Fab段，其识别部位定位于γ链的第一个恒定区(CH1γ)，所以它仅结合IgG,并具有更高的亲和力。已有研究表明，IBPs被广泛用作免疫化学试剂用来鉴定与纯化抗体、在免疫测定与酶联免疫吸附测定系统中可作为加强反应物、作为融合附加物方便重组蛋白质的固定与纯化，并且IBPs还被用于临床上体外免疫吸附，已成为非常有价值的诊断、治疗及制备的工具。但是现有的IBPs的广谱性和结合力仍然不高，并且生产成本也居高不下。

发明内容

本发明的第一方面，提供了一种进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3，其特征在于：具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。

本发明的第二方面，提供了一种编码如权利要求1的进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的cDNA序列，其特征在于：cDNA序列如SEQIDNO:2所示。

本发明的第三方面，提供了一种制备如权利要求1的进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：将新型进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的编码基因克隆入表达载体中，并利用所述表达载体构建表达菌种；

步骤二：对所述表达菌种进行大规模培养，诱导生产进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3，

步骤三：从培养物中分离出具有免疫球蛋白结合活性的多肽溶液，然后进行纯化，得到纯化的新型进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3。

另外，制备进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的方法，还可以具有这样的特征：其中，表达载体为原核载体。

另外，制备进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的方法，还可以具有这样的特征：其中，原核载体为PET-32a(+)。

进一步，制备进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的方法，还可以具有这样的特征：其中，表达菌种为大肠杆菌。

进一步，制备进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3的方法，还可以具有这样的特征：其中，表达菌种为大肠杆菌BL21-TRXB。

本发明的第四方面，提供了进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3在抗体的体外免疫学检测中的应用。

本发明的第五方面，进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3在纯化抗体中的应用。

进一步的，进化免疫球蛋白结合分子D-C-G3在纯化抗体中的应用，其中，应用为在基因工程抗体药物纯化中的应用。

发明作用与效果