[发明专利]一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物领域，具体而言，本发明涉及一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法。

背景技术

聚伞凹顶藻醇（Thyrsiferol），CAS号66873-39-0， mp.133-136℃，分子式C₃₀H₅₃BrO₇，分子量605.65，结构式为：

 

聚伞凹顶藻醇来源于松节藻科(Rhodomelaceae) 聚伞凹顶藻Laurencia thyrsifera Hook.。研究表明，聚伞凹顶藻醇具有细胞毒活性，对小鼠淋巴细胞白血病(P388)体外培养有细胞毒作用，ED50为10ng/mL；抗病毒活性，对单纯性疱疹病毒和疱疹性口炎病毒有抑制作用。

经文献检索，尚无适用于高纯度聚伞凹顶藻醇的易于工业化提取纯化方法的相关专利报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种适用于规模化生产、产品纯度高的提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：

（1）以聚伞凹顶藻为原料，进行干燥、粉碎，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质；

（2）残渣加8-10倍（V/W）75-90%乙醇溶液进行超声循环提取2-3次，每次1-2h，合并提取液；

（3）提取液浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和10-30%乙醇溶液洗脱，再用85%乙醇溶液洗脱，收集85%乙醇洗脱液；

（4）洗脱液浓缩，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:3-5，以氯仿-甲醇混合溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，放置结晶；

（5）分出结晶，丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶。

所述步骤（1）中超临界二氧化碳萃取温度为30-45℃，压力为15-22MPa，萃取时间为0.5-1h。

所述步骤（4）中氯仿-甲醇混合溶液体积比为1:1-7。

综上所述，本发明存在以下优点：

（1）采用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂类物质，快速、高效。

（2）采用超声循环提取的方法，提取效率高。

（3）采用大孔树脂和硅胶短粗柱层析后进行结晶，从而获得含量95%以上的聚伞凹顶藻醇，成本低，分离效果好。

下面将结合具体实施方式对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

具体实施方式

实施例1：

取聚伞凹顶藻粗粉500g，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，萃取温度为30℃，压力为22MPa，萃取时间为1h，残渣加9倍（V/W）90%乙醇溶液进行超声循环提取2次，每次1h，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和30%乙醇溶液洗脱，再用85%乙醇溶液洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩，与100目的硅胶按重量比1:1拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:5，以氯仿-甲醇混合溶液为洗脱剂，依次按1:1、1:4、1:7体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置20小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶159mg，纯度为96.7%。

实施例2：

取聚伞凹顶藻粗粉500g，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，萃取温度为40℃，压力为20MPa，萃取时间为0.5h，残渣加8倍（V/W）80%乙醇溶液进行超声循环提取2次，每次1h，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和30%乙醇溶液洗脱，再用85%乙醇溶液洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩，与200目的硅胶按重量比1:1拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:5，以氯仿-甲醇混合溶液为洗脱剂，依次按1:1、1:3、1:7体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置24小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶146mg，纯度为95.4%。

实施例3：