[发明专利]聚伞凹顶藻醇的制备方法及其在抗白血病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及聚伞凹顶藻醇的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。

背景技术

聚伞凹顶藻醇（Thyrsiferol），CAS号66873-39-0， mp.133-136℃，分子式C₃₀H₅₃BrO₇，分子量605.65，结构式为：

 

聚伞凹顶藻醇来源于松节藻科(Rhodomelaceae) 聚伞凹顶藻Laurencia thyrsifera Hook.。研究表明，聚伞凹顶藻醇具有细胞毒活性，对小鼠淋巴细胞白血病(P388)体外培养有细胞毒作用，ED50为10ng/mL；抗病毒活性，对单纯性疱疹病毒和疱疹性口炎病毒有抑制作用。

白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官，同时正常造血受抑制。临床可见不同程度的贫血、出血、感染发热以及肝、脾、淋巴结肿大和骨骼疼痛。据报道，我国各地区白血病的发病率在各种肿瘤中占第六位。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种聚伞凹顶藻醇的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

聚伞凹顶藻醇的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取：取聚伞凹顶藻粉碎成粗粉，加入90%乙醇溶液，65℃下进行连续逆流超声提取，得到乙醇提取液；

（2）氧化铝柱层析：上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-甲醇混合溶液洗脱，薄层检测，收集聚伞凹顶藻醇流分，浓缩干燥得到聚伞凹顶藻醇粗品；

（3）制备型液相色谱分离：上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集聚伞凹顶藻醇组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得聚伞凹顶藻醇粗晶；

（4）重结晶：将聚伞凹顶藻醇粗晶用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度聚伞凹顶藻醇结晶。

步骤（1）所述乙醇溶液用量为药材的10-12倍（V/W）。

步骤（1）所述超声频率为70-100KHz。

步骤（1）所述提取时间为60-100min。

步骤（2）所述氧化铝为120目，氯仿-甲醇体积比为2:1，用量为柱体积的6倍。

步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈-0.2%乙二胺水溶液，体积比为33:67。

步骤（3）所述紫外检测波长为254nm。

步骤（4）所述丙酮为90-100%的丙酮水溶液。

所述制备的聚伞凹顶藻醇，在制备抗白血病药物中的应用，尤其在制备防治淋巴性白血病和髓细胞白血病的应用。

所述制备的聚伞凹顶藻醇，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。

采用本法制备聚伞凹顶藻醇，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

聚伞凹顶藻醇的制备

取聚伞凹顶藻1kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍90%%乙醇溶液，65℃下进行连续逆流超声提取60min，超声频率为80KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（120目）拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-甲醇（2:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集聚伞凹顶藻醇流分，浓缩干燥得到聚伞凹顶藻醇粗品。以乙腈-0.2%乙二胺水溶液为流动相，体积比为33:67，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，将粗品加入流动相至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，六通阀进样，进样体积为25ml，控制流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为254nm，收集目标成分，减压回收试剂得聚伞凹顶藻醇粗晶，用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度聚伞凹顶藻醇结晶，经HPLC检测，纯度97.2%。

实施例2：

聚伞凹顶藻醇的其在抗白血病药物中的应用

1、材料

动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。