[发明专利]一种扣匹素的制备方法及抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种扣匹素的制备方法及抗肿瘤应用。

背景技术

扣匹素（Tonkinin）为乙酰精宁类化合物，CAS号188295-46-7，分子式C₃₇H₇₀O₄，分子量578.96，分子结构式为：

 

扣匹素来源于番荔枝科(Annonaceae) 扣匹 Uvaria tonkinensis Finet et Gagnep.的根，具有抗肿瘤促进作用，对人型白血病HL-60细胞株和人型结肠腺癌HCT-8细胞株的IC50分别为1μM和6.7μM。

目前，番荔枝科植物次生代谢物番荔枝乙酰精宁类化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，是抗肿瘤药物的候选药物。

目前国内外有关扣匹素的应用文献极少，因扣匹素在植物中的含量较低且提取困难，因此对扣匹素研究带来了较大的局限，因此提取制备扣匹素的研究就成为一个亟待解决的问题。经检索，尚无扣匹素的工业生产方法的专利文献报道。通过文献检索，现有乙酰精宁类活性物质的提取大都是采用硅胶、凝胶色谱法进行分乙醇提回流提取，硅胶、凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂，制备量较小，样品得率低，不适合扣匹素的工业化制备。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种扣匹素的制备方法及抗肿瘤应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种扣匹素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取扣匹的根，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界CO₂萃取，解析，收集扣匹的根萃取物；

（2）萃取物与聚酰胺树脂按重量比1:1-2.5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90%乙醇洗脱，流速为0.8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品；

（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的扣匹素，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集扣匹素组分；

（4）将扣匹素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得扣匹素。

所述步骤（1）中超临界萃取温度为45-55℃，萃取压力为30-43MPa，解析温度为25-42℃，解析压力为6-10MPa，CO₂流量为15-20L/h。

所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相为流动相，主机转速700-1000rpm，流速为1-3mL/min。

所述制备的扣匹素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。

（1）采用超临界提取技术对环境无污染；（2）通过聚酰胺树脂对乙酰精宁类化合物的吸附和洗脱，操作简单、分离效果好；（3）采用高速逆流色谱制备工艺，较制备液相色谱制备工艺而言，克服了样品吸附、损失和峰形拖尾等缺点，且具有制备量大、易于工业推广等优点；（4）添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

扣匹素的制备

取扣匹的根，经粉碎处理，称取1kg，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，通入超临界CO₂流体，CO₂流量为18L/h，超临界萃取温度为48℃，萃取压力为32MPa，解析温度为29℃，解析压力为7MPa，进行超临界CO₂萃取1h，解析，收集萃取物，与聚酰胺树脂按重量比1:1.5充分混匀，装入层析柱，依次用去离子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脱，流速为0.8BV/h，收集高浓度乙醇洗脱液，减压浓缩，得粗品；采用高速逆流色谱法分离纯化粗品中的扣匹素，以体积比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，主机转速1000rpm，泵入下相做流动相，流速为3mL/min，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集扣匹素组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，过滤、洗涤干燥即得扣匹素，含量97.6%。

实施例2：