[发明专利]一种从地骨皮中提取地骨皮总黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从地骨皮中提取地骨皮总黄酮的方法，尤其涉及一种利用生物酶协同超声波提取地骨皮总黄酮的方法。

背景技术

地骨皮为茄科植物枸杞或宁夏枸杞的干燥根皮。味甘、寒，归肺、肝、肾经，具有凉血除蒸，清肺降火之功效，用于阴虚潮热、骨蒸盗汗、肺热咳嗽、咯血及内热消渴等症。现代药理研究表明地骨皮主要具有清除自由基、抗氧化等活性，这些作用和其中的黄酮类有效成分有关，因此，地骨皮中黄酮的提取具有重要的意义。

目前，关于地骨皮总黄酮的提取的专利和文献较少，主要采用回流提取，该方法的缺点在于提取的总黄酮杂质多，收率低，溶剂消耗量大。

酶工程技术是近年来一种新兴的技术，利用纤维素酶、果胶酶、蛋白酶等（主要是纤维素酶）破坏植物的细胞壁，以有利于有效成分最大限度溶出的一种方法因其处理条件温和，有效成分损失较小。再结合超声波的空化效应以及机械效应，从而使细胞中的有效成分得以释放直接与溶剂接触并溶解在其中，从而提高有效成分的提取率。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种提取地骨皮总黄酮的方法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好等优点。

本发明包括以下步骤：

a.地骨皮于60℃烘干、粉碎，过80目筛；

b.向上述原料中加入4~9倍的酸性乙醇溶液，再加入原料1~2%（重量比）的生物酶，搅拌均匀；

c.置于频率为20~40kHz的超声波提取器中，控温在45~60℃，提取90~120min，80℃灭活10min，离心，取上清液；

d.将步骤c中的上清液加入适量的碱调pH值为中性，浓缩至无醇味，转入径高比为1:4~8、粒径为80~100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4~8BV的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得地骨皮总黄酮。

本发明步骤b中所述的酸性乙醇为pH4.0~5.0的60~70%的乙醇溶液。

本发明步骤b中所述的生物酶为重量比0.7:0.3的纤维素酶和蛋白酶的混合物。

本发明步骤d中所述的碱为碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠中的一种。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

（1）总黄酮含量和收率较高：本发明采用生物酶酶解，破坏细胞壁的致密结构，在结合超声波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了总黄酮的提取率；

（2）本发明采用聚酰胺树脂进行分离纯化，该树脂重复利用率高，价格便宜，使用与工业生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

地骨皮于60℃烘干、粉碎，过80目筛，取100g粉末，加入9倍的pH4.0的70%的乙醇溶液，再加入原料1%（重量比）的纤维素酶和蛋白酶（重量比为0.7:0.3）的混合物，搅拌均匀，置于频率为20kHz的超声波提取器中，控温在60℃，提取90min，80℃灭活10min，离心，取上清液，加入适量的氢氧化钠调pH值为中性，浓缩至无醇味，转入径高比为1: 8、粒径为100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4BV的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得地骨皮总黄酮提取物12.8g，经UV检测，总黄酮的含量为71.8%。

实施例2：

地骨皮于60℃烘干、粉碎，过80目筛，取100g粉末，加入6倍的pH4.5的65%的乙醇溶液，再加入原料1.5%（重量比）的纤维素酶和蛋白酶（重量比为0.7:0.3）的混合物，搅拌均匀，置于频率为40kHz的超声波提取器中，控温在50℃，提取120min，80℃灭活10min，离心，取上清液，加入适量的碳酸钠调pH值为中性，浓缩至无醇味，转入径高比为1: 6、粒径为80目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用6BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得地骨皮总黄酮提取物14.2g，经UV检测，总黄酮的含量为75.1%。

实施例3：

地骨皮于60℃烘干、粉碎，过80目筛，取100g粉末，加入4倍的pH5.0的60%的乙醇溶液，再加入原料2%（重量比）的纤维素酶和蛋白酶（重量比为0.7:0.3）的混合物，搅拌均匀，置于频率为20kHz的超声波提取器中，控温在45℃，提取110min，80℃灭活10min，离心，取上清液，加入适量的氢氧化钾调pH值为中性，浓缩至无醇味，转入径高比为1: 4、粒径为100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用8BV的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得地骨皮总黄酮提取物11.5g，经UV检测，总黄酮的含量为69.4%。