[发明专利]牛布鲁菌外膜蛋白Omp22、编码基因及其克隆方法和应用

权利要求书

1.一种牛布鲁氏菌(Bovine brucellosis)外膜蛋白Omp22，其特征在于，由a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质，或b)在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由a)衍生的蛋白质。 

2.编码权利要求1所述的牛布鲁氏菌外膜蛋白Omp22基因。 

3.根据权利要求2所述的牛布鲁氏菌外膜蛋白Omp22基因，其是如下a)或b)： 

a)核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；或 

b)由SEQ ID NO.2所示核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或几个核苷酸得到编码权利要求1所述的牛布鲁氏菌外膜蛋白Omp22的核苷酸序列。 

4.一种用于扩增权利要求2或3所述的基因的引物对，其特征在于，所述引物对序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，分别为： 

上游5`-GAGGGATCCGGAATGTTCAAGCGTTCTATCACC-3； 

下游5`-GCTCGAGCTAGAATTTGTAGTTCAG-3 

所述引物对分别在上、下游引物引入BamH I和Xho I酶切位点。 

5.含权利要求2或3所述基因的克隆载体，其特征在于与所述基因连接的空载体为质粒或粘粒载体。 

6.含权利要求5所述克隆载体的转化细胞系。 

7.一种权利要求2或3所述牛布鲁氏菌外膜蛋白Omp22基因的克隆方法，其特征在于，包括如下步骤： 

1)热裂解法从牛布鲁氏菌液体培养物中提取基因组DNA作为模板， 

2)设计牛布鲁菌外膜蛋白Omp22基因的PCR引物对序列如SEQ ID  NO.3和SEQ ID NO.4所示， 

3)PCR扩增Omp22基因 

4)Omp22基因PCR扩增产物的纯化 

5)Omp22基因PCR扩增产物的与克隆载体的可操作地连于空载体上形成克隆载体， 

6)宿主细胞的转化， 

7)转化细胞系的筛选和鉴定。 

8.如权利要求7所述的Omp22基因的制备方法，其特征在于，所述的空载体为质粒或粘粒载体，所述的原核细胞为大肠杆菌DH5α。 

9.如权利要求7所述的Omp22基因的制备方法的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，所述的宿主细胞为原核细胞。 

10.权利要求1～3任一项所述Omp22蛋白或编码基因的应用，其特征在于，包括在作为布鲁氏菌病的监测和治疗药物研究的靶标、动物布鲁氏菌病诊断试剂、动物布病疫情调查的试剂盒，制备布鲁氏杆菌疫苗、制备布鲁氏杆菌DNA疫苗中的应用。