[发明专利]一种制浆造纸漂白预处理用半纤维素酶的制备和应用

权利要求书

1.一种制浆造纸漂白预处理用半纤维素酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将ATCC56765里氏木霉菌种置于马铃薯葡萄糖葡萄糖水中，在25～35℃，180rpm条件下培养48小时，产生孢子；然后将制得的孢子接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基中进行固体培养，在25～35℃条件下培养1～4天，产生发育良好的单菌落；

(2)将步骤(1)制得的发育良好的单菌落置于马铃薯葡萄糖水中进行液体培养，在30℃、150～180rpm条件下培养48小时，培养出液体种子；

(3)将碳源、氮源、葡萄糖和mandles营养液混合均匀后于121℃条件下灭菌1小时得到底物，底物冷却后转入发酵罐，将步骤(2)制得的液体种子接种到装好底物的发酵罐中发酵培养1～4天，得到菌液；

(4)将步骤(3)得到的菌液离心分离后收集清液，得到酶的粗提液；将粗提液透析后进行层析纯化，得到半纤维素酶液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的组成为：20％马铃薯汁、葡萄糖、磷酸二氢钾、七水合硫酸镁、硫胺素和琼脂，其比值为1L：20g：3g：1.5g：8mg：20g；所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基pH值为4～6。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述20％马铃薯汁配制方法为：取去皮马铃薯200g，切成小块，加1L水，煮沸20min，滤去马铃薯块，然后加水将滤液补足1L，得到所述20％马铃薯汁。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述液体种子的接种量为1～5％。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述碳源为玉米芯，麸皮，壳聚糖，粗半纤维素，或是玉米芯、麸皮、壳聚糖和粗半纤维素酶混合物中的一种；所述氮源为牛肉膏。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述碳源、氮源、葡萄糖和mandles营养液的添加量分别为10～20g/L、10～20g/L、0.1～0.5％和0.01～0.10％，其中的百分数是葡萄糖或mandles营养液的质量与发酵液体积的百分比。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中发酵培养的具体条件为：罐压0.01～0.08MPa，初始风量为800m³/h，培养4小时后风量开至1500m³/h，初始搅拌转速为120r/min；培养4小时后搅拌转速调为180r/min，在培养过程中补加缓冲溶液将pH值维持在5.5，菌体培养温度为25℃～35℃，当pH稳定不变时加入甲醇。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸二氢钠或磷酸氢二钠；所述发酵罐中通入的空气、补加的缓冲溶液及甲醇均经过灭菌处理。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中采用CM-Sephadex作为交换介质，pH值为6.0的磷酸缓冲液对粗提液进行阳离子交换层析。

10.权利要求1所述制备方法得到的半纤维素酶在制浆造纸漂白领域中的应用。