[发明专利]一种同时检测血浆中复方丹蒌片主要成分的方法

权利要求书

1.一种液相色谱串联质谱法同时检测血浆样本中葛根素、芒柄花黄素、芍药苷、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的方法，包括：步骤(1)样品的制备和步骤(2)采用液相色谱串联质谱法进行检测；

所述步骤(1)样品的制备采用包括以下步骤的方法：

a)向待测血浆样品中加入混合内标溶液、甲酸，并混匀；所述混合内标溶液中内标为大黄素和栀子苷；其中，大黄素作为葛根素、芒柄花黄素、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的内标，栀子苷作为芍药苷的内标；

b)加入乙酸乙酯提取剂，混匀后静置；

c)离心，收集上清液，氮气吹干，收集干燥物；

d)将得到的干燥物用甲醇复溶，混匀、离心，取上清液；

所述步骤(2)检测所用液相色谱条件如下：

色谱柱为C₁₈柱；

流动相由乙腈和体积分数为0.1％甲酸水溶液组成；

洗脱方式为梯度洗脱；

所述梯度洗脱的程序如下：

0-10min：乙腈的体积分数由10％增加至30％；

10-15min：乙腈的体积分数由30％增加至90％；

15-24min：乙腈的体积分数维持90％不变。

2.一种液相色谱串联质谱法同时检测血浆样本中葛根素、芒柄花黄素、芍药苷、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量的方法，包括下述步骤：

1、标准曲线的制备：

取一系列浓度的葛根素、芒柄花黄素、芍药苷、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的混合标准品溶液加入空白血浆样品中，按照权利要求1所述的样品制备方法进行制备，然后对得到的上清液按照权利要求1所述的液相色谱串联质谱法进行检测，并分别记录每个浓度的葛根素、芒柄花黄素、芍药苷、丹参酮ⅡA和隐丹参酮对应的峰面积；

以葛根素与内标峰面积比值Y为纵坐标，以葛根素浓度X为横坐标，制备葛根素的线性回归方程；

以芒柄花黄素与内标峰面积比值Y为纵坐标，以芒柄花黄素浓度X为横坐标，制备芒柄花黄素的线性回归方程；

以芍药苷与内标峰面积比值Y为纵坐标，以芍药苷浓度X为横坐标，制备芍药苷的线性回归方程；

以丹参酮ⅡA与内标峰面积比值Y为纵坐标，以丹参酮ⅡA浓度X为横坐标，制备丹参酮ⅡA的线性回归方程；

以隐丹参酮与内标峰面积比值Y为纵坐标，以隐丹参酮浓度X为横坐标，制备隐丹参酮的线性回归方程；

2、待测血浆样品中葛根素、芒柄花黄素、芍药苷、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量测定：

将待测血浆样品按照权利要求1所述的样品制备方法进行制备，然后对得到的上清液按照权利要求1所述的液相色谱串联质谱法进行检测，并分别记录葛根素、芒柄花黄素、芍药苷、丹参酮ⅡA和隐丹参酮对应的峰面积；

计算葛根素与内标峰面积比值Y，将Y值代入所述葛根素的线性回归方程中，计算得到所述待测血浆样品中葛根素的浓度；

计算芒柄花黄素与内标峰面积比值Y，将Y值代入所述芒柄花黄素的线性回归方程中，计算得到所述待测血浆样品中芒柄花黄素的浓度；

计算芍药苷与内标峰面积比值Y，将Y值代入所述芍药苷的线性回归方程中，计算得到所述待测血浆样品中芍药苷的浓度；

计算丹参酮ⅡA与内标峰面积比值Y，将Y值代入所述丹参酮ⅡA的线性回归方程中，计算得到所述待测血浆样品中丹参酮ⅡA的浓度；

计算隐丹参酮与内标峰面积比值Y，将Y值代入所述隐丹参酮的线性回归方程中，计算得到所述待测血浆样品中隐丹参酮的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤a)中，所述待测血浆样品与甲酸的体积比为100:20；

步骤b)中，所述静置的时间为2-5min；所述待测血浆样品与乙酸乙酯的体积比为1:5-10；

步骤a)、b)、c)和d)中，所述混匀均采用涡旋的方式，涡旋的时间均为1-2min；

步骤c)和d)中，所述离心的条件均为18000×g-19000×g离心10-15min。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述液相色谱条件中，色谱柱为Agilent Eclipse Plus C₁₈柱，规格为：4.6mm×100mm，填料直径为1.8μm；流动相流速为400μL/min；柱温为50℃；进样量为5μL。