[发明专利]检测5-HTTLPR片段多态性的方法和引物无效

申请号：	201410258375.8	申请日：	2014-06-11
公开（公告）号：	CN104120177A	公开（公告）日：	2014-10-29
发明（设计）人：	王淑一;周晓犊	申请（专利权）人：	杭州艾迪康医学检验中心有限公司
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68;C12N15/11
代理公司：	浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100	代理人：	徐关寿
地址：	310023 浙江***	国省代码：	浙江;33
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摘要：
搜索关键词：	检测 httlpr 片段多态性方法引物
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【权利要求书】：

1.检测5-HTTLPR片段多态性的引物，其特征在于，所述引物包括扩增5-HTTLPR片段的正、反向引物，其碱基序列为：

HTTLPR-F：5’-CAGCACCTAACCCCTAATGT-3’

HTTLPR-R：5’-GCCGGTTGGGCTAGCGTCTA-3’。

2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物的使用浓度比为：HTTLPR-F : HTTLPR-R=1:1。

3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，5-HTTLPR片段多态性选自LL纯合基因型、LS杂合基因型和SS纯合基因型。

4.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向扩增引物的扩增反应条件为：第一阶段，95 ℃ 预变性10min；第二阶段，变性温度94 ℃ 30sec，退火温度58 ℃ 90sec，延伸温度72 ℃ 30sec，循环35次；第三阶段，72 ℃ 10min；第四阶段，扩增反应结束，扩增产物在4 ℃下保存。

5.一种检测5-HTTLPR片段多态性的方法，其包括如下步骤：

（1）提取样品DNA；

（2）利用正、反向引物HTTLPR-F和HTTLPR-R对（1）中的DNA进行扩增，获得扩增产物；

（3）对（2）中的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，获得电泳图；

（4）根据所述电泳图中的条带分布，确定5-HTTLPR片段的多态性，其特征在于，

HTTLPR-F：5’-CAGCACCTAACCCCTAATGT-3’

HTTLPR-R：5’-GCCGGTTGGGCTAGCGTCTA-3’。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤（2）的扩增反应条件为：第一阶段，95 ℃ 预变性10min；第二阶段，变性温度94 ℃ 30sec，退火温度64 ℃ 90sec，延伸温度72 ℃ 30sec，循环35次；第三阶段，72 ℃ 10min；第四阶段，扩增反应结束，扩增产物在4 ℃下保存。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在琼脂糖凝胶电泳中，所述琼脂糖浓度为1%。

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