[发明专利]一种透明质酸的提纯工艺

说明书

技术领域

本发明涉及生物多糖提取技术领域，特别是涉及一种透明质酸的提纯工艺。

背景技术

国内目前有十几家透明质酸的生产厂家，且这些企业大多数是用动物组织提取法。从动物组织中提取ＨＡ常用的原料有鸡冠、脐带和猪皮等，主要工艺过程包括脱水、磨碎、浸泡、提取、除杂、沉淀和分离。这种方法的特点是工艺流程简单，适用于原料来源分散的小规模生产。但由于原料有限，且原料中ＨＡ的含量低，同时ＨＡ又还与硫酸软骨素等粘多糖共存于生物组织中，致使其收率低、提纯难、成本过高、产品质量差，且难以应用于大规模生产。随着ＨＡ需求量的不断增大，迫切要求生产大量的高质量ＨＡ，动物组织提取法己不能适应这种要求。 国外从上世纪70年代开始研究利用发酵法生产透明质酸，采用发酵法生产的透明质酸质量稳定、原料易得，成本低。

目前微生物发酵法生产透明质酸采用的工艺发酵周期长、产物相对分子量低、产品透光率差、蛋白质含量高、葡萄糖醛酸含量低。有的透明质酸的形态为纤维状，不易溶解。

发明内容

本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种透明质酸的提纯工艺。本发明采用添加活性炭、珍珠岩、白硅藻土、EDTA结合大板框过滤技术去除透明质酸中的杂质，添加剂常见易得，操作相对简单，杂质含量更低。生产易于控制，适合工业化大规模生产，收率高，并且大大降低了生产成本。

本发明的一种透明质酸的提纯工艺技术方案为，该透明质酸采用兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）AWA008发酵结束后压入沉淀罐中，兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）AWA008保藏编号是：CGMCCNo.9111，保藏日期是2014年04月29日；提纯工艺包括以下步骤：

（1）前沉淀：向沉淀罐里在搅拌情况下缓缓地加入90-98%的酒精，至产生雪花状沉淀，控制温度，收集沉淀物；

（2）溶解：用氯化钠溶液将沉淀物溶解，调节pH至9.3-9.5，加入EDTA、活性炭、珍珠岩，搅拌均匀；

（3）过滤：将溶解后的料液压入1#大板框过滤一遍后，过滤液调pH9.3-9.5。再加入白硅藻土和珍珠岩后，搅拌均匀后，压入2#大板框过滤第二遍。二遍过滤液中加入硅藻土，搅拌均匀后，料液通过不锈钢板打循环澄清后，过滤第三遍，澄清度在99.5%以上，然后过滤液通过聚丙烯滤芯过滤至洁净间沉淀罐；

（4）后沉淀：料液调pH至7.0-7.3，搅拌下缓缓地加入95%酒精至沉淀产生，控制酒精度数47-50度即可。静止20-40分钟后将上清液打入废酒精罐；

（5）脱水离心:用75%-80%的pH值在7.0-7.3之间的酒精脱水6-7次，然后再用90%的酒精脱水2-3次，脱水后酒精度数到90%以上，静止1-3小时，打走上清液，取样测pH值，并控制在7.0-7.3之间。搅拌15-20分钟后离心；

（6）干燥。

优选的，步骤（1）中酒精浓度为95%，

步骤（1）中温度为 47-50度。

步骤（2）氯化钠溶液浓度为1-5%。

步骤（2）中，加入EDTA、活性炭、珍珠岩质量比为，1: 10-15: 20-30。

优选的，步骤（2）中，加入EDTA、活性炭、珍珠岩质量比为，1:11: 25。

步骤（3）中，白硅藻土和珍珠岩的质量比为1:1-10。

优选的，步骤（3）中，白硅藻土和珍珠岩的质量比为1:1.5。

步骤（3）中过滤液通过0.22微米聚丙烯滤芯过滤至洁净间沉淀罐。

步骤（6）具体为：将离心好的物料放入干燥罐，设定温度30℃，抽真空干燥3小时后，每小时升温5℃，设温60℃时停止，检测水分，水分小于7%后出罐。

一种兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）AWA008，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号是：CGMCCNo.9111，保藏日期是2014年04月29日。

目前该兽疫链球菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，其保藏编号是：CGMCCNo.9111，菌种的拉丁文名称是Streptococcus zooepidemicus，参据的微生物（株）：AWA008，保藏日期是2014年04月29日。