[发明专利]一种具有唾液酸水解酶活性的蛋白质的制备方法

权利要求书

1.具有唾液酸水解酶活性的蛋白质的制备方法，包括将Cce sia-1的编码基因在生物细胞中进行表达得到具有唾液酸水解酶活性的蛋白质的步骤；

所述Cce sia-1，是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；

b)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白质；

c)将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有唾液酸水解酶活性的蛋白质；

d)将SEQ ID No.4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有唾液酸水解酶活性的蛋白质；

所述生物细胞为微生物细胞、植物细胞或非人动物细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述将Cce sia-1的编码基因在生物细胞中进行表达包括将所述Cce sia-1的编码基因导入所述生物细胞的步骤。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述Cce sia-1的编码基因通过含有所述Cce sia-1的编码基因的重组载体导入所述生物细胞。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述Cce sia-1的编码基因为如下1)或2)或3)或4)或5)所示的核酸分子：

1)编码序列是序列表中SEQ ID No.1的第106-2217位核苷酸的DNA分子或cDNA分子；

2)核酸序列是序列表中SEQ ID No.1的第1-2217位核苷酸的DNA分子；

3)编码序列是序列表中SEQ ID No.3的第1-2175位核苷酸的DNA分子或cDNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1所述蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；

5)在严格条件下与1)或2)或3)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述微生物为酵母、细菌、藻或真菌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述细菌为大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，所述重组载体为用SEQ ID No.1的第106-2217位所示的DNA分子替换pET-28a(+)的Nde I和BamH I识别位点间的片段得到的重组载体pET-28a/Cce sia-1。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述将Cce sia-1的编码基因在生物细胞中进行表达包括将所述重组载体pET-28a/Cce sia-1导入所述大肠杆菌E.coli BL21(DE3)得到重组大肠杆菌，使所述Cce sia-1的编码基因在所述重组大肠杆菌中表达得到具有唾液酸水解酶活性的蛋白质。

9.唾液酸水解酶的制备方法，包括从权利要求1-8中任一所述的方法得到的具有唾液酸水解酶活性的蛋白质中纯化得到Cce sia-1的步骤，所述Cce sia-1为唾液酸水解酶。