[发明专利]一种制备高纯度萝卜硫素的方法

说明书

一、技术领域

本发明属于萝卜硫素分离制备的技术领域，具体涉及从萝卜籽中提取萝卜硫素的方法。

二、背景技术

硫代葡萄糖苷是十字花科蔬菜中的一种芥子苷，在硫代葡萄糖苷酶或酸的催化下，芥子苷水解，生成萝卜硫素等异硫氰酸酯和葡萄糖。科学研究发现，萝卜硫素的化学名为1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷或1-异硫氰酸-4-甲磺酰基-(2-烯)丁烷，是迄今为止蔬菜中发现的最强抗癌成分之一，它可诱导机体产生II型解毒酶，该酶能防止致癌物质破坏健康细胞内的遗传因子，所以，从十字花科蔬菜中分离纯化1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷或1-异硫氰酸-4-甲磺酰基-(2-烯)丁烷具有重要的科学价值和广阔的市场前景。

目前，从十字花科蔬菜中提取萝卜硫素的方法有：①申请号为200910098197.6、名称为“一种萝卜硫素的提取方法”的发明专利，该专利公开的方法是：用干燥西兰花种子或新鲜西兰花球为原料，粉碎加入水，调节pH4.1～4.5，加入粗芥子硫苷酸酶水解后冷冻干燥成粉末；加入丙酮，浸提，过滤，将滤液真空浓缩成萝卜硫素粗品；然后将其通过硅胶柱层析，用乙酸乙酯和乙醇的混合液梯度洗脱，收集馏分，真空浓缩；用甲醇溶解，再经0.2um微孔滤膜过滤后，用C18硅胶装柱，采用甲醇水梯度洗脱，收集萝卜硫素馏分，真空干燥，得到萝卜硫素。该方法存在的主要问题是：1.未对种子进行脱脂，由于油脂的阻挡，西兰花种子中的芥子苷和芥子硫苷酸酶难以有效接触，导致萝卜硫素的生成率低；2.未对提取的芥子硫苷酸酶进行固定化，游离酶的半衰期短，易失活；3.使用的有机溶剂-丙酮致酶蛋白变性能力强，导致芥子硫苷酸酶大量变性而失活。因此，该方法导致原料利用率低、萝卜硫素生成率低，丙酮回收率低而污染环境，生产成本高，缺乏竞争力。②《食品工业科技》2012年第33卷第4期80～82页刊登的论文“高效液相色谱法测定西兰花中萝卜硫素的研究”，该论文公开的提取萝卜硫素的方法是：西兰花种子在无光照条件下发芽48h，冷冻干燥成粉末，加入正己烷脱脂并挥发脱除溶剂后，在加入去离子水混合均匀，水浴处理2h，再加入氯化钠并用等体积乙酸乙酯萃取3次，收集、合并萃取液，用旋蒸器减压蒸馏，除去乙酸乙酯，直至残留液呈黄油状液体时止。接着用10％的乙腈溶解残留液，然后用0.45um的微孔滤膜过滤，最后用旋蒸器减压蒸馏，除去滤过液中的乙腈和水，获得萝卜硫素。该方法存在的主要问题是：1.水解时未调节到硫代葡萄糖苷酶所需的最佳pH值，导致硫代葡萄糖苷酶的活力低，萝卜硫素产率低；2.使用有机溶剂乙酸乙酯和乙腈，两种溶剂均易挥发，异味重，有毒性，空气污染严重；因此，该方法生产的萝卜硫素成本也高，同样缺乏竞争力。

三、发明内容

本发明的目的是针对现有制备萝卜硫素的方法的不足之处，提供一种制备高纯度萝卜硫素的新方法，该方法具有充分利用资源，萝卜硫素生成率高、操作简单、溶剂可反复回收利用、产品纯度高达98％以上，绿色无污染等特点。