[发明专利]亚甲蓝的一种抗急性脑缺血损伤用途

说明书

技术领域

本发明涉及亚甲蓝的一种抗急性脑缺血损伤用途。大鼠经大脑中动脉闭塞缺血后，立即腹腔注射亚甲蓝，并在缺血后多个时间点给药，能够明显减小大鼠永久性脑缺血后梗死灶的体积，提高大鼠的行为能力。 

背景技术

缺血性脑卒中占脑卒中病人总数的70％-80％，它是导致成人残疾的首因。治疗缺血性脑卒中的药物多达几十种之多，但目前的用药多以溶栓为主，有些药物副作用还很大，即便如此，由于时间窗的问题(得病后6小时以内，3小时以内为黄金治疗期)，在我国仅有1.6％的患者能够得到及时的溶栓治疗，即使在美国也只有5％的病人能得到及时溶栓治疗。因此，能缓解急性期的脑缺血损伤和减轻随后的永久性脑梗死的救治药物凸显尤为重要。 

亚甲蓝(化学式C16H18ClN3S)又称亚甲基蓝、次甲基蓝、次甲蓝、美蓝、品蓝、甲烯蓝、瑞士蓝。亚甲蓝属于芳香杂环化合物，1876年由Heinrich Caro合成，自1890s起用于实验室和临床。亚甲蓝在临床上的应用包括以下几个方面：1.低浓度时，亚甲蓝能使高铁血红蛋白还原为氧合血红蛋白，故亚甲蓝可治疗高铁血红蛋白血症。2.高浓度时，亚甲蓝能将氧合血红蛋白的铁氧化为三价铁，而形成高铁血红蛋白，利用此作用可治疗氰化物中毒。3.亚甲蓝能使膀胱结石溶解，故可用于尿路结石，对草酸钙结石疗效较好。4.亚甲蓝与神经组织有较强的亲和力，可作用于神经末梢，治疗神经性皮炎。5.其他治疗：亚甲蓝还可以治疗感染性休克、闭塞性脉管炎、血管瘤等。此外，有研究报道亚甲蓝在大鼠脑缺血再灌损伤中具有保护作用，提示可能用于脑缺血溶栓治疗后的保护作用。但是目前能够及时得到溶栓治疗的患者只占缺血性脑卒中患者的2％左右，亚甲蓝对另外98％错过黄金治疗期而带来的永久性神经功能损伤的患者是否能起到保护作用尚未见研究报道。 

发明内容

本发明公开了亚甲蓝的一种抗急性脑缺血损伤用途。大鼠经大脑中动脉闭塞后即刻腹腔注射亚甲蓝((本发明中应用的亚甲蓝由Amresco公司生产，优选的用药剂量是1mg/kg，5mg/kg，10mg/kg，更优选的是5mg/kg)，并在缺血后多个时间点继续给药，能够明显减小大鼠永久性脑缺血造成的梗死体积，改善大鼠的行为能力。通过本发明的方法，采用在适宜时间注射合适剂量的亚甲蓝，就能够提高大鼠等动物对抗急性脑缺血损伤的能力，为临床治疗缺血性脑卒中提供了有力的实验证据。若能得以推广到人体应用，将有较好的经济效益和社会效益。 

本发明的申请人采用线栓法对成年大鼠进行大脑中动脉闭塞造成局灶性脑缺血，栓塞后即刻经腹腔注射不同剂量的亚甲蓝，并在缺血后多个时间点给予上述剂量的亚甲蓝注射，在缺血24小时后观察大鼠的行为能力和脑梗死程度，评价亚甲蓝对急性脑缺血损伤的保护作用。 

具体实施方式

材料： 

1)戊巴比妥钠，德国进口，北京试剂公司分装。 

2)1％戊巴比妥钠注射液：取1g戊巴比妥钠粉末，溶于100ml生理盐水中，充分混匀，制成1％戊巴比妥钠注射液100ml，用于动物麻醉，以大鼠体重为依据，按照0.5ml/100g用量使用。 

3)亚甲蓝(methylene blue，MB)分子式C16H18ClN3S是杂环芳香族染料，属于噻嗪类染料家族，无臭深蓝色晶体，溶于水和氯仿，但不溶于酒精，避光保存，Amresco公司生产，效期安全。其水溶液呈蓝色，现用现配。 

4)10mg/kg亚甲蓝腹腔注射液：称取90mg亚甲蓝粉末，溶于30ml生理盐水中，充分混匀，制成3mg/ml亚甲蓝腹腔注射液30ml，以大鼠体重为依据，按照0.33ml/100g用量使用，即得10mg/kg的实际用量。 

5)5mg/kg亚甲蓝腹腔注射液：取上述配制的10mg/kg亚甲蓝腹腔注射液10ml，溶于10ml生理盐水 中，充分混匀，制成1.5mg/ml亚甲蓝腹腔注射液20ml，以大鼠体重为依据，按照0.33ml/100g用量使用，即得5mg/kg的实际用量。 

6)1mg/kg亚甲蓝腹腔注射液：取上述配制的10mg/kg亚甲蓝腹腔注射液2ml，溶于18ml生理盐水中，充分混匀，制成0.3mg/ml亚甲蓝腹腔注射液20ml，以大鼠体重为依据，按照0.33ml/100g用量使用，即得1mg/kg的实际用量。 

7)氯化三苯基四氮唑(2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC)，分子式C19H15C1N4，白色至浅黄色结晶粉末，用作分析试剂和色谱分析试剂，sigma公司进口，避光保存。