[发明专利]低出生体重儿基因变异检测用引物及其检测试剂盒、检测方法和应用

权利要求书

1.低出生体重儿基因变异检测用引物，其特征在于：包括分别对应3个待检变异位点的3对共6条引物，3个待检变异位点分别为基因片段rs900400、rs1482853和rs900399，6条引物分别简写为：G1F、G1R、G2F、G2R、G3F和G3R；其中，引物G1F和G1R扩增位点为rs900400，G2F和G2R扩增位点为rs1482853，G3F和G3R扩增位点为rs900399。

2.根据权利要求1所述的低出生体重儿基因变异检测用引物，其特征在于：所述6条引物的序列分别为：

G1F：5’-ATTACATCAATGTCCTTTACTTGC-3’

G1R：5’-AAAAGTCATTTTCCCCAAAGAAAC-3’

G2F：5’-ATTACATCAATGTCCTTTACTTGC-3’

G2R：5’-AAAAGTCATTTTCCCCAAAGAAAC-3’

G3F：5’-TACATCAATGTCCTTTACTTGCAT-3’

G3R：5’-CAAAAGTCATTTTCCCCAAAGAAA-3’。

3.一种用于检测低出生体重儿基因变异的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括权利要求1~2任一项所述的引物。

4.一种使用权利要求 3所述的试剂盒检测低出生体重儿基因变异的检测方法，其特征在于：依次包括如下步骤：

A、提取模板DNA：从待检者的血液中提取基因组DNA，作为PCR扩增的模板DNA；

B、PCR扩增：以上述提取的基因组DNA为模板，采用所述引物进行PCR扩增，得到DNA扩增产物；

C、PCR产物纯化：采用纯化板对上述DNA扩增产物进行纯化，得到纯化DNA；

D、测序反应：采用Sanger方法对纯化DNA进行测序；

E、结果分析：采用测序峰图分析软件对测序结果进行分析。

5.根据权利要求4所述的一种检测低出生体重儿基因变异的检测方法，其特征在于：所述步骤B中，PCR扩增的反应体系以30μL计为：

10X rTaq缓冲液                3μL

2.5mM dNTP                   2μL

10mM引物F                  1μL

10mM引物R                  1μL

10~30ng/μL模板DNA          2μL

rTaq聚合酶                   0.2μL

ddH₂O                       20.8μL。

6.根据权利要求4所述的一种检测低出生体重儿基因变异的检测方法，其特征在于：所述步骤B中，PCR扩增的反应条件为：1）95℃预变性5min；2）95℃变性30s，56℃退火30s、72℃延伸45s，共35个循环；3）72℃后延伸10min；4）12℃保藏。

7.根据权利要求4所述的一种检测低出生体重儿基因变异的检测方法，其特征在于：所述步骤C中，PCR产物纯化的步骤具体为：向96孔纯化板孔中加入100μL ddH₂O，将上述DNA扩增产物加入96孔纯化板中室温静置10min，真空抽滤10min至抽干；向96孔纯化板中加入40μL ddH₂O，室温溶解10min，取出对应的孔中的纯化产物至另一个96孔PCR板中，回收纯化产物，得到纯化DNA。

8.根据权利要求4所述的一种检测低出生体重儿基因变异的检测方法，其特征在于：所述步骤D中，测序的反应体系以6μL计为：

30~50ng /μL纯化 DNA         2μL

3pM测序引物                 1μL

Bigdye                        2μL

DMSO                        1μL。

9.根据权利要求4所述的一种检测低出生体重儿基因变异的检测方法，其特征在于：所述步骤D中，测序的反应条件为：1）95℃预变性2min；2）95℃变性30s，55℃退火30s、60℃延伸45s，共30个循环；3）12℃保藏。

10.一种权利要求 3所述的试剂盒在检测低出生体重儿基因变异的应用。